目的:肝纤维化是一种肝组织细胞外基质过度堆积而导致肝结构或功能异常的病理过程。中药胡黄连中含有的胡黄连苦苷Ⅰ具有利胆保肝的药理作用,有望成为抗肝纤维化的候选药物。本研究将探讨胡黄连苦苷Ⅰ是否能够抗硫代乙酰胺(TAA)诱导的肝纤维化,利用代谢组学及蛋白质组学手段探讨其作用机制;采用质谱技术研究胡黄连苦苷Ⅰ体内代谢过程和药物动力学规律。方法:1.将小鼠随机分为空白组、模型组(TAA)、阳性药物组(TAA+S-腺苷甲硫氨酸10 mg/kg)、低剂量组(TAA+胡黄连苦苷Ⅰ25 mg/kg)、中剂量组(TAA+胡黄连苦苷Ⅰ50 mg/kg)和高剂量组(TAA+胡黄连苦苷Ⅰ75mg/kg),TAA(200mg/kg)每周腹腔注射三次,S-腺苷甲硫氨酸或胡黄连苦苷Ⅰ每天灌胃给药一次。8周后检测各组小鼠血清转氨酶及肝纤维四项指标,肝组织切片进行苏木精-伊红染色或天狼星红染色观察形态学变化。2.各组小鼠尿液、血清及肝脏样本经沉淀法处理后进行液质联用分析,所得数据经预处理后进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,以VIP>1、P<0.05为条件筛选差异代谢物,利用HMDB、Metlin数据库或标准品比对鉴定差异代谢物。3.空白组、模型组、阳性药物组小鼠肝脏样本经提取、酶解、标记后进高p H反相液相色谱分离,所得馏分进入纳升液相色谱串联Q Exative质谱进行分析,质谱数据用Mascot软件实现定性定量,差异蛋白筛选条件为P<0.05且差异倍数<0.83(或>1.2)。部分重要差异蛋白利用蛋白质印迹和实时定量逆转录聚合酶链式反应手段进行验证。4.建立大鼠血浆中胡黄连苦苷Ⅰ的超高效液相串联三重四级杆质谱含量测定方法,并用于口服给药(75mg/kg)后胡黄连苦苷Ⅰ药动学研究。另外利用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱技术检测口服给药后胡黄连苦苷Ⅰ在大鼠尿液、血清、粪便、胆汁中的代谢产物。结果:胡黄连苦苷Ⅰ能在一定程度上逆转肝纤维化引起的小鼠血清转氨酶及肝纤维四项指标(Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原氨基端原肽、层粘连蛋白及透明质酸)含量升高,减少肝细胞炎症细胞浸润和胶原纤维堆积。经过胡黄连苦苷Ⅰ干预后,肝纤维化小鼠体内三羧酸循环、支链氨基酸代谢、甘油磷脂代谢被调节;上游CYP8B1上调,下游胆酸、牛磺胆酸下调;谷胱甘肽水平上调,转谷氨酰胺酶下调;上游鞘氨醇激酶2上调,下游鞘磷脂水平下调。胡黄连苦苷Ⅰ大鼠口服后吸收迅速,在30 min时即能达到峰值浓度,且消除较快。胡黄连苦苷Ⅰ在体内可检出15个代谢产物,代谢途径涉及羟化、脱氧、水解、葡萄糖醛酸化、硫酸化及甲基化。结论:胡黄连苦苷Ⅰ具有一定的抗肝纤维化作用,能逆转肝纤维化引起的能量、脂质、谷胱甘肽代谢紊乱,调节鞘氨醇信号通路、初级脂肪酸合成、PPAR信号通路。该药物在体内吸收和消除快,呈现出广泛代谢特征。