氟喹诺酮类(Fluoroquinolones, FQNs)药物是一种人工合成的新型抗菌药物,随着广泛用于动物和人类的多种感染性疾病的治疗[1～2],其残留问题已引起了人们的高度重视。目前,检测FQNs药物残留常用的方法有HPLC[3～5]、ELISA等,其中ELISA法操作简便,灵敏度又高,适用于大量快速检出残留药物。本研究旨在建立这种间接竞争ELISA残留检测的方法。本实验首先是把常用的恩诺沙星(ENRO)、诺氟沙星(NFLX)、达氟沙星(DFLX) 3种FQNs类药物,用N-羟基琥珀酰亚胺法与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联成各自的完全抗原,并且进行紫外扫描光谱等鉴定。通过免疫新西兰白兔制备出了各自的抗血清。然后采用间接竞争ELISA分别与其它几种常用的FQNs类药物(恩诺沙星、沙拉沙星、诺氟沙星、达氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星、培氟沙星)做竞争反应。通过计算交叉反应率,成功的筛选出了达氟沙星(DFLX)能同时与本身及恩诺沙星(ENRO)、沙拉沙星(SALX)、诺氟沙星(NFLX)、洛美沙星(LMLX)、氧氟沙星(OFLX)5种FQNs类药物同时发生竞争反应,且交叉反应率较高。优化ELISA条件后,理想的包被抗原浓度为1.25μg/L,多抗(DFLX-PcAb)的工作浓度为1:10000,酶标二抗的工作浓度为1:4000。并且得到回归方程(y=0.7975-0.125x R2=0.989)、标准曲线和最适检测范围(0.1～10ng /L)。通过评价这种方法,可得批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%;准确度(标准回收率)为104.41%;灵敏度(最低检测限)为0.8ng/mL。以上各项指标均符合ci-ELISA检测的要求,从而建立了DFLX药物残留的间接竞争ELISA检测法。