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本文对金色链霉菌进行紫外和氯化锂复合诱变及EMS诱变处理,并结合前体物质丙二酸,葡萄糖的结构类似物2-脱氧葡萄糖及去甲金霉素本身进行定向筛选,选育出菌株1-E1-12,效价为5102u/ml且传代稳定,比对照提高了20.3%。通过Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验和响应面优化,对金色链霉菌的发酵培养基进行优化。首先通过Plackett-Burman实验找到了影响效价的3个主要因素玉米淀粉、生黄豆粉和碳酸钙,并通过响应优化对发酵培养基进行第一次优化。在此基础上,通过最陡爬坡实验确立三个因素的中心点浓度,继而进行响应面优化,确定了最终三个因素的最优水平分别为玉米淀粉110g/L,生黄豆粉43g/L,碳酸钙7g/L,采用优化的发酵培养基平均化学效价为5435u/ml,比对照提高了25-31%。初步探讨导致效价提高的原因,根据优化前后培养基成分和C/N的变化,设计相应的实验,结果表明效价的提高可能是由于氨基酸、碳氮比以及培养基中其他成分协同作用所致。对发酵培养基优化前后胞内外主要的三种有机酸、还原力及CoA羧基转移酶进行分析,实验结果表明优化培养基中金色链霉菌发酵中期在胞外积累了更多的草酰乙酸和丙二酸,发酵后期两种有机酸进入胞内,大量合成去甲金霉素。优化培养基中还原力在发酵过程中始终高于初始培养基,从而为去甲金霉素的合成提供了充足的还原力。CoA羧基转移酶活力直观反映了金色链霉菌合成去甲金霉素的能力,实验结果表明该酶比活的变化趋势是与效价相吻合的。根据去甲金霉素的代谢途径,添加糖酵解途径的抑制剂柠檬酸钠、BT和NAA。在48-72h添加0.02%柠檬酸钠可使效价提高8%左右。发酵起始添加50-100ug/m1NAA和0.26ug/mlBT分别使效价提高了10%左右和13.3%。此外,48h添加0.01%的丙二酸使效价提高了13.4%。