9种常见致病军团菌基因芯片检测方法的建立

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军团菌是引起军团病(Legionnaires disease,LD)和庞蒂亚克热(Pontiacfever)的主要病原菌,它广泛存在于天然淡水环境、土壤环境和人工水域中。由于军团病容易暴发流行,并且致死率高,所以引起人们的广泛关注,对于公共卫生意义显著。但由于军团病与其他病原体引起的肺炎比较难辨别,因此建立一种快速、特异、灵敏的检测方法就尤为重要。目前针对军团菌的检测方法有主要细菌培养、血清学检测、尿抗原检测和分子生物学检测。但是现有的检测方法都具有一定的局限性,检测种类较少,相似菌种之间不容易区分,常常出现漏检、误检情况,并且检测时间长、操作的步骤繁琐,费时费力。本研究的目的就是利用军团菌的gyrB特异基因,结合基因芯片的方法,建立起一种准确、快速、高通量的针对常见致病军团菌的检测方法。   本研究针对9种常见致病军团菌:嗜肺军团菌(包括 pneumophila亚种和freseri亚种)、米克戴得军团菌、博兹曼军团菌、长滩军团菌、茴香军团菌、沃氏军团菌、戈曼军团菌、杜莫夫军团菌、菲氏军团菌,基于gyrB基因,设计了43条种特异性探针,利用61株标准菌株和近缘菌株对所设计的探针进行了筛选,最终得到28条,建立起特异检测上述9种常见致病军团菌的基因芯片。该方法在基因组DNA水平上的灵敏度为0.1 ng,纯菌水平上的灵敏度可达到103CFU/mL,具有较高的灵敏度。用我们建立的芯片检测方法对12瓶矿泉水和8例空调冷凝水进行了检测,并与16S rRNA测序结果比较,结果显示,芯片检测结果完全正确。上述实验结果表明运用基因芯片技术所建立的检测方法检测时间短、灵敏度高、特异性强,可应用于水质监测、流行病调查等领域,具有良好的可实用性。
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