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目的:探讨电针足三里对大鼠肠缺血再灌注损伤后肠屏障和远隔脏器功能障碍的保护作用及其机制。 方法:取72只SD雄性大鼠(250±20g)采用夹闭肠系膜上动脉根部30min恢复灌注60min的方法制备大鼠肠缺血再灌注损伤模型。随机分为6组:肠缺血再灌注组(IR),电针足三里组(EA),电刺激迷走神经组(VNS),α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂PNU282987组(PNU),迷走神经切断加电针足三里组(VX),α7烟碱型乙酰胆碱受体阻断剂ɑ-银环蛇毒素(ɑ-bungarotoxin)加电针足三里组(α-BGT),每组12只。EA组于肠缺血后即刻行电针双侧足三里穴30min,强度为2~3mA,频率2~100Hz;IR组采用与EA组相同频率和强度电针双侧非经穴(足三里穴外侧旁开0.5cm)30min;VNS组于肠缺血后即刻行电刺激右侧颈部迷走神经20min(2mA,1Hz);PNU组于肠缺血后即刻腹腔注射α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂PNU282987(1-10mg/kg);VX组于肠缺血后即刻行腹腔迷走神经切断后电针足三里穴;α-BGT组于肠缺血后即刻腹腔注射α7nAChR阻断剂α-银环蛇毒素(1μg/kg)后电针足三里穴。于再灌注60min,处死各组动物,取血和肠、肺、肝组织,酶联免疫吸附法(Elisa)检测血浆和组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-8(IL-8)水平,并测定血浆脏器功能指标:丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);取远端回肠组织,病理切片苏木素-伊红染色,观察小肠组织的病理学变化,记录肠损伤评分;于再灌注30min回肠远端制备5cm肠袋,注入FITC标记的葡聚糖(4KDFITC-dextran),再灌注60min腹主动脉取血,用荧光分光光度法测定血浆中FITC-dextran浓度以测定肠粘膜通透性;于再灌注60min,取远端回肠组织,免疫荧光染色及蛋白质印迹法(WesternBlot)检测小肠组织中紧密链接蛋白1(ZO-1)的分布与表达变化。 结果:1.与IR组相比,电针足三里穴、电刺激迷走神经和腹腔注射PNU282987均显著抑制肠缺血再灌注后血浆及肠、肺、肝组织TNF-α和IL-8水平(各P<0.05);切断腹腔迷走神经或腹腔注射ɑ-bungarotoxin后电针足三里的抗炎作用消失;2.再灌注60mim,EA、VNS和PNU组动物肠绒毛损伤较轻,肠损伤评分显著低于IR组(0.85±0.13,0.6±0.09,1.1±0.23vs.2.18±0.19;各P<0.05);切断腹腔迷走神经或腹腔注射ɑ-bungarotoxin可减弱或去除电针足三里对肠绒毛损伤的保护作用,肠损伤评分高于IR组(2.6±0.33,2.9±0.19vs.2.18±0.19;各P<0.05);3.与IR组相比,电针足三里穴、电刺激迷走神经和腹腔注射PNU282987均显著抑制缺血再灌注造成的肠粘膜通透性增高,血浆中FITC-dextran浓度为(EA组:69.65ng/mL±8.65ng/mL,VNS组:56.37ng/mL±10.95ng/mL,PNU组:66.84ng/mL±11.10ng/mLvs.IR组:225.36ng/mL±28.12ng/mL;各P<0.05);切断腹腔迷走神经或腹腔注射ɑ-bungarotoxin可降低电针足三里对肠粘膜通透性增高的抑制作用,FITC-dextran浓度为(VX组:249.67ng/mL±14.67ng/mLvs.IR组:225.36ng/mL±28.12ng/mL,P<0.05;ɑ-BGT组:234.5ng/mL±23.5ng/mLvs.IR组:225.36ng/mL±28.12ng/mL;P>0.05);4.与IR组相比,电针足三里穴、电刺激迷走神经和腹腔注射PNU282987均可维持肠缺血再灌注后紧密连接蛋白ZO-1的完整性,调节ZO-1的正常表达;切断腹腔迷走神经或腹腔注射ɑ-bungarotoxin则降低电针足三里的该作用,缺血损伤导致ZO-1断裂,荧光强度降低,表达减少;5.再灌注60mim,EA、VNS和PNU组动物血浆ALT,CK-MB,BUN和Cr显著低于IR组(各P<0.05),而VX和α-BGT组与IR组无显著性差异。 结论:电针足三里可抑制肠缺血再灌注后局部炎症反应,降低肠粘膜损伤及粘膜通透性增高,维持和调节肠上皮紧密连接蛋白ZO-1的正常分布与表达,从而保护肠屏障功能,进而预防远隔器官和全身炎性反应,保护远隔脏器功能,防止全身炎性反应及多脏器衰竭的发生;而切断腹腔迷走神经或腹腔注射α7烟碱型乙酰胆碱受体阻断剂α-银环蛇毒素后电针足三里的上述作用减弱或消失,表明电针足三里的上述作用是通过兴奋胆碱能抗炎通路实现的,并依赖迷走神经完整性发挥作用,且可能与α7烟碱型乙酰胆碱受体有关。