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黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）是我国特种鱼类中养殖产量名列前茅的养殖品种,其中杂交黄颡鱼“黄优1号”新品种（GS-02-001-2018）的诞生为其产业持续稳定的增长做出了卓有成效的贡献。“黄优1号”是以黄颡鱼（♀）×瓦氏黄颡鱼（♂）杂交为基础生产的品种,由于种间生殖隔离,不仅受精受到影响,还会因胚胎发育时产生高比例的异常胚胎而影响孵化,导致杂交子代中的畸形率很高。本实验室前期发现了杂交黄颡鱼畸形率高的原因可能是父系线粒体自噬不完全,不能完全消除。此外,我们发现亮氨酸可以影响细胞自噬,通过对黄颡鱼注射亮氨酸可以改善精子活力。因此,本研究以L-精氨酸和L-亮氨酸为调控因子,在精子保存液中单独或共同添加,研究不同浓度对黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼杂交时的受精和孵化的影响,查明最适添加浓度,探讨两种氨基酸之间是否存在协同效应。并发明一种更适合黄颡鱼人工繁殖的新型孵化桶,以寻求建立一种高效而便捷的人工繁殖方法,为指导繁殖实践提供科学依据。实验主要研究结果如下:1.不同浓度L-精氨酸对受精和孵化的影响实验对L-精氨酸的浓度梯度作单因子倍差设计,浓度范围为0.25-8.00 mmol/L。结果显示,受精率随着精氨酸浓度的等倍增加,呈先升后降的趋势。各浓度组的受精率均显著高于对照组（p＜0.05）,其中以0.50 mmol/L的浓度组最高,达（69.83±1.52）%,显著高于除1.00 mmol/L浓度组以外的其余各浓度组（p＜0.05）;添加8.00mmol/L的最高浓度组受精率最低,仅为（58.08±0.58）%,显示高浓度具有一定的负效应。回归分析表明,受精率对精氨酸浓度的响应呈线性相关,求得最适浓度为0.449mmol/L。与受精率不同,精氨酸对孵化率和畸形率均无显著影响（p＞0.05）。2.不同浓度L-亮氨酸对受精和孵化的影响实验对L-亮氨酸也作相同设计,浓度范围为0.05-1.60 mmol/L。结果显示,随着亮氨酸浓度的增加,受精率和孵化率呈先升后降,而畸形率呈先降后升的趋势。在0.10-0.80 mmol/L浓度组的受精率均显著高于对照组（p＜0.05）,其中以0.80mmol/L浓度组的受精率最高,达（72.37±1.92）%,显著高于除在0.20-0.40 mmol/L浓度组以外的其余各浓度组。在0.20-1.60 mmol/L浓度组的孵化率均显著高于对照组（p＜0.05）,其中以0.80 mmol/L浓度组的孵化率最高,达（77.94±3.90）%,显著高于在0.05-0.10 mmol/L的浓度组和1.60 mmol/L浓度组（p＜0.05）。在0.10-1.60mmol/L浓度组的畸形率均显著低于对照组（p＜0.05）,其中以0.80 mmol/L浓度组的畸形率最低,为（6.80±2.17）%,显著低于在0.05-0.10 mmol/L的浓度组和1.60mmol/L浓度组（p＜0.05）。实验还显示,当浓度到1.60 mmol/L时,对受精率、孵化率和畸形率具有一定的负效应。回归分析表明,受精率、孵化率和畸形率对亮氨酸浓度的响应呈指数相关,求得最适浓度分别为0.834 mmol/L、0.969 mmol/L和0.968mmol/L。3.不同浓度L-精氨酸和L-亮氨酸共同作用对受精和孵化的影响实验对L-精氨酸和L-亮氨酸作2因子3水平的3~2正交设计,精氨酸的浓度水平为0.2 mmol/L,亮氨酸的浓度水平为0.5 mmol/L。实验结果显示,精氨酸0.2 mmol/L浓度对应的亮氨酸1.5 mmol/L水平组、精氨酸0.4 mmol/L浓度对应的亮氨酸3个水平组和精氨酸0.6 mmol/L浓度对应的亮氨酸1.0-1.5 mmol/L水平组的受精率均显著高于对照组（p＜0.05）,受精率提高了29.19%-44.85%。两种氨基酸各水平组的孵化率均显著高于对照组（p＜0.05）,提高了19.44%-38.06%;畸形率与孵化率相反,各水平组均显著低于对照组（p＜0.05）,降低了48.49%-77.11%。显示这两种氨基酸组合的最适浓度为精氨酸0.4 mmol/L和亮氨酸1.0 mmol/L,与对照组相比,受精率和孵化率分别提高了44.85%和38.06%,畸形率降低了77.11%。为查明繁殖效率改变的原因,我们使用CASA分析对精子活力做进一步的验证。其中,三个处理组分别为0.4mmol/L精氨酸、1.0mmol/L亮氨酸以及0.4mmol/L精氨酸+1.0mmol/L亮氨酸。实验结果显示,与对照组相比,处理组能够显著增加精子活力以及提高精子运动的时间（p＜0.05）,以同时添加精氨酸与亮氨酸达到最高,参数为VAP（120.76±3.76μm/s）、VSL（123.19±3.11μm/s）、VCL（126.28±5.98μm/s）。同时精子运动时间大幅度提高,其中以0.4 mmol/L精氨酸+1.0mmol/L亮氨酸联合处理运动时间最久（111.67±2.05 s）,显著高于对照组约30 s,快速精子与慢速运动的精子运动时间均有增加。结果显示,精氨酸与亮氨酸可以显著提高了精子活力,且两者具有协同作用。4.新型孵化桶对受精和孵化的影响我们检测了两种不同孵化桶对黄颡鱼杂交繁殖效率的影响,使用设计的新型孵化桶的孵化率比传统孵化桶显著提高（p＜0.05）,畸形率却显著降低（p＜0.05）。受精率和孵化率分别比传统孵化桶提高了15.13%和20.76%;畸形率比传统孵化桶降低了20.25%。对黄颡鱼种内,添加或不添加氨基酸种间杂交使用新型孵化桶作进一步生产性验证。结果显示,种内杂交的受精率和孵化率均显著高于种间杂交,而畸形率却显著低于种间杂交（p＜0.05）;添加0.4 mmol/L的精氨酸和1.0 mmol/L的亮氨酸组合的最适浓度,种间杂交的受精率可恢复到种内杂交88.48%的水平,孵化率高于种内杂交,畸形率却低于种内杂交,但均无显著差异（p＞0.05）,表明其孵化率和畸形率均可恢复到种内杂交水平。该实验表明,在精子保存液中直接添加精氨酸和亮氨酸,对改善受精和孵化具有显著的促进和协同效应。新型孵化桶的受精率、孵化率和畸形率均能满足人工孵化和生产实践的需求,这将有助于提高人工繁殖的效率,也是新品种推广实现高效益的关键,对新品种的产业化和整个产业的发展都具有重大的意义。