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目的:胆汁淤积是胆汁分泌和排泄障碍的一种病理状态,急性胆汁淤积会迅速出现高胆红素血症,导致肝细胞死亡、肝纤维化、肝衰竭甚至死亡。到目前为止,有效的治疗方法依然有限,因此发现新的治疗方法尤为重要。熊去氧胆酸(ursodesoxycholic acid,UDCA)是我国治疗胆汁淤积的主要药物,但是一些患者对其反应较差。研究显示,双环醇是临床常用的保肝药物,能增强肝脏解毒功能、降低肝损害患者的血清转氨酶水平、改善肝脏多种生化指标、清除氧自由基、保护肝细胞膜稳定性和肝细胞线粒体、抑制炎性细胞因子表达等。本课题的研究目的是观察双环醇对小鼠胆总管结扎胆汁淤积性肝损伤的治疗效果,并深入研究其相关机制,为发现胆汁淤积治疗的新方法奠定基础。方法:选取18只健康的11周龄雄性c57BL/6小鼠,将胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)造模小鼠随机分为BDL手术组(手术组,n=6)和BDL+双环醇组(实验组,n=6),打开腹腔游离胆总管不予结扎的小鼠为假手术组(阴性对照,n=6)。手术后第1天到第14天,每日给予实验组小鼠100mg/kg悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose,CMC)的双环醇,同时,假手术组和手术组给予相同体积0.5%CMC。每日观察小鼠一般状况及测量体重。在第15天处死小鼠,收集小鼠血清及肝脏。测定血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatas,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,GGT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)含量;采用HE染色法对肝脏进行病理观察以及Ishak评分系统对各组小鼠肝脏进行病理评分;采用RT-PCR分析小鼠肝脏组织的法尼醇受体(farnesoid X receptor,FXR)、胆固醇-7α羟化酶(cytochrome P450 7A1,CYP7A1)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)、I型胶原α1(collagen1a1,COL1A1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量,采用Western blot对小鼠肝脏组织的Smad2/3的蛋白表达进行分析。结果:1、血清学分析结果显示:BDL手术组的ALT、AST、ALP、GGT和TBIL水平较假手术组的明显升高(P<0.001),BDL+双环醇组ALT、AST、ALP、GGT和TBIL较手术组降低(P<0.05)。2、肝脏组织学分析显示:HE染色显微镜下观察,假手术组小鼠肝脏未见异常,手术组小鼠肝脏可见纤维条索、小胆管扩张、增生、炎症细胞浸润和细胞变性坏死,实验组上述异常明显减轻。3、基因水平分析结果显示:手术组与假手术组小鼠相比,FXR和BSEP的m RNA表达明显下降(P<0.001),CYP7A1、TGF-β1和IL-1β的m RNA表达明显升高(P<0.001),TNF-α和COL1A1的m RNA表达明显升高(P<0.05);实验组与手术组小鼠相比,FXR和BSEP的m RNA表达明显升高(P<0.05),而CYP7A1、TGF-β1、IL-1β、TNF-α和COL1A1的m RNA表达明显下降(P<0.05)。4、蛋白表达含量结果显示:实验组小鼠肝脏组织的Smad2/3蛋白表达量较手术组明显降低(P<0.05)。结论:在BDL胆汁淤积性肝损伤的小鼠模型中,双环醇能有效降低血清转氨酶水平、抑制炎症反应。双环醇抗胆汁淤积作用明显,可能与其通过作用于FXR进而抑制胆汁酸合成限速酶CYP7A1使胆汁酸合成减少和激活胆汁酸转运蛋白BSEP进一步促进胆汁排泄有关。双环醇在BDL小鼠模型中抗纤维化作用明显,可能与其抑制TGF-β1减少胶原沉积有关。