猪链球菌病是由猪链球菌（Streptococcus suis,SS）引起的细菌性传染病,主要导致猪的败血症、脑膜炎和关节炎,副猪嗜血杆菌病和猪传染性胸膜肺炎是分别由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）和猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）引起的主要的猪呼吸道传染病,这三种疾病给养猪业造成了巨大的损失。本研究将SS的保护性抗原EF和APP的保护性抗原OMP、Apx I、Apx II完整序列或截短序列分别克隆至pET-28a和pCold-sumo载体上,再转化至E.coli BL21（DE3）中构建了重组菌株,经过诱导、表达、纯化获得重组蛋白rEF、rOMP、rApx I和rApx II。再利用本研究室前期构建的pET-28a-sly/BL21、pET-28a-mrp/BL21、pET-28a-oppa/BL21、pET-28a-oppa2/BL21、pET-28a-afua/BL21和pET-22b-cdtb/BL21 6株重组表达菌株,表达、纯化SS的rSLY、rMRP和HPS的rOPPA、rOPPA2、rAfu A、rCdt B。将上述10种重组蛋白等量混匀,再与ISA 201佐剂乳化制成三联苗,使每一剂疫苗中各蛋白的含量为20μg。将血清2型SS（SS2）464株和血清9型SS（SS9）GZ2株按照不同比例稀释后感染C57小鼠;将血清5型HPS（HPS5）HN10株、血清13型HPS（HPS13）ZD12株、血清5型APP（APP5）MD株和血清7型APP（APP7）S-8株按照不同比例稀释后感染BALB/c小鼠,统计上述6个菌株对小鼠的最小致死剂量（MLD）。将20只C57小鼠和40只BALB/c小鼠随机分成2组（每组含10只C57和20只BALB/c）,间隔14d分别皮下免疫2次300μL PBS+ISA 201佐剂和三联苗。二免后14d采集小鼠血清,通过间接ELISA检测各组小鼠的EF、MRP、SLY、OPPA、OPPA2、Cdt B、Afu A、OMP、Apx I和Apx II的抗体水平。首免后28d,将C57小鼠再按照免疫组别平均分为2组,分别以SS2和SS9的MLD攻毒;同理,将BALB/c小鼠再平均分为4组,分别以HPS5、HPS13、APP5和APP7的MLD攻毒。结果显示:SS2和SS9对C57小鼠的MLD为5×10~7CFU/只,HPS5、HPS13、APP5和APP7对BALB/c小鼠的MLD分别为1.5×10~8CFU/只、5×10~7CFU/只、1.5×10~8CFU/只和7.5×10~8CFU/只。与免疫前相比,二免后14d实验组小鼠体内EF、SLY、MRP、OPPA、OPPA2、Cdt B、Afu A、OMP、Apx I和Apx II的抗体平显著升高（p<0.0001）,对照组小鼠体内对10种抗原的抗体水平无差异;实验组与对照组二免后抗体水平差异显著（p<0.0001）。攻毒实验中,对照组小鼠在观察期内全部死亡,攻毒SS2、SS9、HPS5、HPS13、APP5和APP7的实验组小鼠存活率分别为100%（5/5）、80%（4/5）、60%（3/5）、80%（4/5）、80%（4/5）、100%（5/5）,对照组和实验组的存活率有显著差异（p<0.05）。结论:该三联苗免疫攻毒保护结果较好,对SS2、SS9、HPS5、HPS13、APP5和APP7毒株攻毒小鼠具有良好的交叉保护性,为进一步研究及应用提供了实验基础。