单纯疱疹病毒2型gD模拟抗原表位的筛选及其真核表达载体的构建

来源 :泰山医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ZHENGDAN0226
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的: (1)用噬菌体展示技术筛选HSV-2gD的模拟抗原表位; (2)对筛选的结果应用生物信息学软件DNAStar protean进行蛋白质二级结构和B细胞抗原表位的分析,进一步确定HSV-2gD的模拟抗原表位; (3)构建人IL-18真核表达载体; (4)构建HSV-2gD模拟抗原表位的真核表达载体。 方法: (1)以HSV-2gD单克隆抗体作为固相筛选蛋白,对噬菌体12肽库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的生物筛选,挑取噬斑,用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定阳性噬菌体克隆,提取阳性噬菌体的单链DNA,进行测序,并分析结果; (2)应用生物信息学软件DNAStar protean对筛选的结果进行蛋白质二级结构和B细胞抗原表位的分析,进一步确定HSV-2gD的模拟抗原表位; (3)TRIZOL法提取丙型肝炎病人肝脏组织的总RNA,应用TAKARA逆转录试剂盒将RNA逆转录成eDNA; (4)以pcDNA3.1-作为真核表达载体,应用DNAStar和Primer Pream软件设计两个目的基因的引物,即人IL-18和HSV-2gD模拟抗原表位; (5)应用PCR技术扩增目的基因:人IL-18和HSV-2gO模拟抗原表位,并用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果; (6)应用基因工程技术将两个目的片段分别克隆到PMD-18 T simple vector中; (7)将两个目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1-中,构建DNA疫苗。 结果: (1)通过四轮特异性淘洗,筛选得到11个阳性噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA测序,从测序结果可以看出共有7个序列的同源性较高,其中有两个氨基酸基序即P*PLW和PYH**H出现的机率较高,可能为HSV-2gD的模拟抗原表位; (2)生物信息学软件分析两个氨基酸基序的代表:即短肽P3和P6,可以确定两者均具有形成模拟抗原表位的可能性; (3)成功扩增了两个目的片段:600bp左右大小的人IL-18和60bp左右大小的HSV-2gD模拟抗原表位P6; (4)将人IL-18与PMD-18 T simple vector连接成功。 结论:通过噬菌体展示技术,成功地筛选出了HSV-2gD的模拟抗原表位,经过生物信息学分析可以确定PYH**H和P*PLW都可能是HSV-2gD抗原模拟表位的基序;成功地获得了HSV-2gD模拟抗原表位P6的目的片段,并将人IL-18与T载体连接,为下一步实验奠定了基础。
其他文献
选矿厂更换下来的运输皮带,一般可用于皮带运输机的挡板,刮板和刹车带。我矿选矿厂在增产节约、技术革新的活动中,对旧运输皮带又开发了几种新用途,降低了材料消耗,节约了生
我矿西部盲斜井设计倾角23°30″,井筒长度506m,初期采用P-30B耙斗装岩机出渣,φ800×600绞车提升,0.75m~3翻斗式矿车运输,每次提升一车。掘进开始时由于井筒浅,出渣矛盾尚
本文介绍倾斜式隔仓板的结构、工作原理及安装方式,并分析了提高产量和降低能耗的原因。 This paper introduces the structure, working principle and installation metho
消除健康贫困成为人类当前主要任务之一。联合国《1997-2006年消除贫困的10年规划》,提出从经济、文化、健康、环境等方面全面消除世界贫困,特别是发展中国家的贫困现象。2000
过滤过程使用的助剂,都可以称作助滤剂。添加助剂可以提高设备效率,降低滤饼水份或改善滤饼机械性质,减少滤布阻塞,延长滤布寿命。但是,通常只把那些能够降低滤饼水份的化合
The characteristics of USB data acquisition system NI cDAQ and its control software LabVIEW are briefed.The methods for controlling GDS pressure and volume cont
青年大学生是中国特色社会主义事业的接班人和有力建设者,他们的理想信念是否正确、坚定,关系着国家的命运。针对当前大学生理想信念功利性和感性化日渐凸显这一态势,本文提
习近平总书记在全国教育大会上指出了现代教育的根本任务和发展目标,党中央、国务院也提出了“三全育人”的要求并启动了“三全育人”综合改革试点.为了响应“三全育人”的号
经常看到一些文章描写水客之可怕,一早来回N次,货架上哗啦一下就空了,留下一地垃圾。   针对水客来往,香港居民有反对有支持,有的不堪其扰,认为打乱了正常的生活,有的认为反对水客是忘记了香港自由贸易、白手起家的生存之本。   水客进行的是商品价格套利,比如香港以及其他免税地的国外商品便宜,运回内地后可以获得差价。另一些人则是安全套利,最典型的是买药品、买奶粉,大家相信国际标准与发达地区食品安全性
一种使建材行业实验室采样实现机械化的环锤立式破碎机,最近在机械电子工业部西安振兴机械厂投入批量生产,设备运行正常,产品质量稳定,预计1990年内将有300台新型破碎机投放