论文部分内容阅读
目的:通过高通量测序分析,筛选出人乳腺癌耐阿霉素细胞与野生型的乳腺癌细胞中差异表达的miRNAs,研究乳腺癌耐阿霉素细胞中低表达的miRNA-375和高表达的miRNA-217对人乳腺癌耐阿霉素细胞增殖以及侵袭、迁移能力的影响。方法:通过WST-1实验先验证得到的乳腺癌耐药细胞是否为稳定的耐药细胞。通过对野生型乳腺癌细胞和耐阿霉素的乳腺癌细胞的样品进行Small RNA高通量测序分析,获取正常乳腺癌细胞和耐阿霉素的乳腺癌细胞差异表达miRNA信息;选择一些差异表达的miRNA,用Real-time RT-PCR实验对筛选出差异表达显著的mi RNA进行验证。将miR-217 inhibitor和inhibitor NC、miR-375模拟物(miR-375 mimics)和mimics NC分别转染MCF-7/Adr;阿霉素处理后用WST-1法检测耐阿霉素细胞的增殖情况;流式细胞仪检测MCF-7/Adr细胞周期和凋亡;细胞划痕和transwell迁移、侵袭实验检测MCF-7/Adr细胞的迁移和侵袭能力。结果:1、通过WST-1实验验证得到的乳腺癌耐药细胞为稳定的耐药细胞,对不同药物浓度的阿霉素,耐药的乳腺癌细胞比野生型的乳腺癌细胞有更明显的耐受性。2、高通量测序结果显示:与配对的野生型的乳腺癌细胞相比,有多个miRNAs在耐阿霉素的乳腺癌细胞中表达异常。3、Real-time RT-PCR结果显示:miR-375在耐阿霉素的乳腺癌细胞中表达显著降低,miR-217在耐阿霉素的乳腺癌细胞中表达显著提高。4、WST-1实验显示在乳腺癌耐药(MCF-7/adr)细胞中分别转染高表达的miR-217、阴性对照组inhibitor NC和低表达的miR-375、模拟物对照组mimics NC,发现表达72h后,与对照组相比转染小分子的乳腺癌耐药细胞的生长速度均明显减慢。5、流式细胞仪测细胞周期、凋亡结果显示:上调miR-375和下调mi R-217的表达后,可以提高MCF-7/Adr细胞对阿霉素的敏感性并促进其凋亡;可以将MCF-7/Adr细胞周期阻滞在G1期。6、Tranwell迁移实验结果显示:上调miR-375和下调miR-217的表达均可以使乳腺癌耐阿霉素细胞的迁移能力降低。7、Tranwell侵袭实验结果显示:上调miR-375和下调miR-217的表达均可以使乳腺癌耐阿霉素细胞的侵袭能力降低。8、细胞划痕结果显示:上调miR-375和下调miR-217的表达会使MCF-7/Adr细胞的迁移能力降低。结论:1、miR-217在乳腺癌耐阿霉素细胞中表达水平显著高于野生型的乳腺癌细胞;miR-375在乳腺癌耐阿霉素细胞中表达水平显著低于野生型的乳腺癌细胞。2、上调乳腺癌耐阿霉素细胞中miR-375的表达,下调乳腺癌耐阿霉素细胞中miR-217的表达水平,均可以增加MCF-7/Adr细胞对阿霉素的敏感性。