论文部分内容阅读
目的:巨大儿(macrosomia)是指出生体重≥4,000 g的新生儿。目前世界范围内,巨大儿的发生率都呈增长的趋势。巨大儿不仅能引起胎儿窒息、死产、肩难产、出生损伤等产科问题,而且会增加成年后罹患糖尿病、肥胖、代谢综合征和癌症等疾病的风险。因此,开展巨大儿发生的危险因素研究,对预防和控制成年疾病的发生具有重要意义。胰岛素样生长因子1(Insulin-Like Growth Factor1,IGF-1),是由70个氨基酸组成的单链多肽,主要由肝细胞合成和分泌。孕期,胎盘、胎膜、子宫蜕膜和胎儿也可产生IGF-1。至今为止,已有许多研究证明IGF-1在胎儿生长发育中有着重要作用,但其作用机制尚不完全清楚。MicroRNA(miRNA)是一类内源性的非编码短链RNA,其大小长约22个核苷酸。MiRNA会以碱基互补配对的方式识别靶基因,并根据其互补程度的大小降解靶基因或者抑制靶基因的翻译。研究发现,miRNA可调节细胞增殖、分化和凋亡等多种生命活动。近年来的表观遗传学研究为探讨疾病发生机制提供了新的思路,表观遗传学改变是解释遗传和环境因素共同导致疾病发生的重要机制。有研究发现,相关基因的甲基化变异会影响到胎儿的出生体重。胎盘中一些miRNA的异常表达与低出生体重及先兆子痫相关。然而,IGF-1基因甲基化的改变及miRNA异常表达是否参与巨大儿形成尚不清楚。 方法:1.研究对象:连续收集一年之内于温州医科大学附属育英儿童医院进行常规产前检查,并在该院分娩的129例单胎、足月新生儿及产妇为研究对象。入选的标准为正常妊娠,单胎、足月分娩,糖耐量试验正常而且新生儿没有先天性畸形。巨大儿组为出生体重≥4,000 g的新生儿和产妇,正常出生体重儿组(对照组)为出生体重在2,500-3,999 g的新生儿和产妇,与巨大儿分娩时间相差3天以内。研究对象排除有妊娠合并症者、有妊娠并发症者和新生儿有先天畸形者。收集母亲相关资料和新生儿发育状况,采集胎盘和脐血标本。 2.实验方法:采用qRT-PCR法检测胎盘IGF-1 mRNA及miRNA表达,双抗体夹心ABC-ELISA法测定脐血IGF-1蛋白浓度,采用Methprimer预测IGF-1基因启动子区CpG岛,飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)定量检测CpG岛内的甲基化位点甲基化水平。利用MiRTarBase软件预测miRNA的靶基因,DAVID分析这些靶基因所涉及的细胞信号通路。最后利用spss14.0进行统计学分析。 结果:1.共收集巨大儿59例,正常出生体重儿70例,基线资料比较发现,新生儿性别、母亲孕前BMI、孕周和孕前体重两组间存在统计学差异。胎盘及脐血IGF-1启动子区CpG位点均呈低甲基化状态。与正常体重儿组(对照组)比较,巨大儿组胎盘IGF-1甲基化水平和胎盘IGF-1表达量无统计学差异(P值分别为0.967、0.925)。两组间胎盘IGF-1甲基化水平和mRNA表达量也未显示有意义的相关性(r=0.128,P=0.295)。脐血IGF-1启动子区平均甲基化率和三个位点甲基化率、脐血IGF-1浓度在两组间差别没有统计学意义。但是,随着孕周的增加,脐血IGF-1浓度及胎盘IGF-1 mRNA表达表现出先增加后降低的趋势,并有错峰现象,即对照组在38周达到高峰,而巨大儿组则在39周出现峰值。 2.以所有研究对象的出生体重的上四分位数间距(4,260 g)为拐点,进行分组分析发现,出生体重<4,260 g组的脐血IGF-1浓度显著高于≥4,260 g组(P=0.045),且与出生体重呈正相关关系(r=0.240,P=0.014);出生体重<4,260g组的胎盘IGF-1 mRNA表达量也显著高于≥4,260 g组(P=0.005),与出生体重呈正相关关系(r=0.264,P=0.022)。该研究结果表明,在出生体重<4,260 g范围内,IGF-1表达量的增加贡献于胎儿出生体重的增长。但当胎儿过度增长时,存在负反馈调节机制,使表达量降低,以限制胎儿过度增大。 3.本研究共检测了胎盘miR-143、miR-21和,miR-16三个miRNA表达水平。结果发现,巨大儿组胎盘miR-21表达高于对照组,而miR-143表达低于对照组(P<0.05),miR-16在两组间没有统计学差异(P=0.955)。以四分位数分割miRNA表达量,logistic回归分析显示,随miR-21表达水平增加,巨大儿发生的危险增加: Q2, OR=6.67(95% CI:1.39-32.05); Q3, OR=4.10(0.88-19.11); Q4, OR=16.19(2.46-106.68)。miR-143则存在相反的趋势:Q2,OR=0.22(95% CI:0.049-0.98); Q3,OR=0.11(95% CI:0.024-0.55); Q4,OR=0.16(95% CI:0.032-0.79)。此外,logistic分析还发现miR-21和miR-143存在交互作用,进一步通过生物信息学分析表明,二者共同参与MAPK信号通路的调节。 结论:1.胎盘和脐血IGF-1启动子区的甲基化水平未显示与巨大儿发生有关联; 2.胎盘IGF-1的表达量及脐血IGF-1浓度与出生体重呈双向性关联,其拐点在4,260 g,而不是4000 g。两者均与处于低甲基化状态的胎盘IGF-1的甲基化程度无关。 3.胎盘miR-21和miR-143可能通过MAPK信号通路共同参与巨大儿的形成过程。