冬凌草提取物对采后水果致腐菌的抑制作用研究

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本文以济源产冬凌草为原料,对其抑菌物质的最佳提取工艺条件进行了初步探索,进一步通过抑菌实验测定冬凌草提取物对常见水果致腐菌的抑菌活性。主要研究内容与结论如下:(1)分别采用乙醇加热回流提取、超声辅助提取、微波直提和微波辅助回流提取法提取冬凌草中抗菌性活性物,其中,乙醇加热回流提取方法的提取时间较长,效率低;微波直提法和微波辅助回流提取法,提取时间较短,但微波直提得率较低,而微波辅助回流提取法并没有显著提高提取率。与这三种提取方法相比,超声辅助提取法提取时间较短,冬凌草提取物的量相对最高,10g冬凌草获得0.783g提取物。采用单因素和正交实验对超声辅助乙醇回流提取冬凌草抗菌活性物质的影响因素进行了优化,获得最佳提取工艺条件为:超声功率为90W,提取液乙醇浓度为85%,料液比为1:25和超声提取时间30min。在此最优提取条件下,冬凌草提取物的得率较高,平均得率达到89.22mg/g。(2)采用滤纸片法对不同含量的冬凌草提取物对枯草芽孢杆菌、黑曲霉、青霉菌、酵母菌、炭疽杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌8株致腐菌抑制活性进行了研究。通过观察和对比抑制圈直径,冬凌草提取物对8株致腐菌都具有一定的抑制能力,尤其对5株细菌表现出较强的抗菌能力,当冬凌草提取物浓度达到10mg/mL时,对5株细菌的抑菌率达到90%以上,而且冬凌草提取物浓度对霉菌孢子的萌发也有较好的抑制作用,当冬凌草提取物浓度达到10mg/mL时,抑菌率达到70%以上;对8株致腐菌的冬凌草提取物最小抑菌浓度(MIC)和最小致死浓度(MFC)测定结果表明绿脓杆菌的MIC最低(3.13mg/mL),黑曲霉菌最高(25mg/mL);绿脓杆菌、炭疽杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌的MFC相同,为12.5mg/mL,青霉菌的MFC为25mg/mL,黑曲霉的MFC为50mg/mL。高浓度的冬凌草提取物不能完全杀死金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,说明冬凌草提取物对致腐菌的抑制具有较强的选择性。(3)通过针刺法,在常温下观察了在水果果实上接种提取物对相应病害发生的防治效果。结果表明,冬凌草提取物在大于致死浓度的情况下均能不同程度的抑制青霉菌、炭疽病菌、黑曲霉和酵母对桔子、苹果、桃等新鲜水果的侵染,均能有效推迟果实发病和降低发病率,并且随着处理浓度升高抑制效果增强。
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