论文部分内容阅读
本文主要通过三方面进行研究,即对红霉素组分的检测技术进行优化,基因工程菌种子生长质量的控制和50L发酵罐上发酵放大研究。在试验中我们建立了测定发酵液中红霉素组分的高效液相色谱法。借鉴常用的红霉素成品高效液相分析方法,对流动相的缓冲液系统进行了优化,发现以0.025M磷酸氢二钾:乙腈=60:40作为流动相,红霉素A、B、C组分能够达到很好的分离效果。改进了红霉素发酵液的预处理方式,采用冷冻干燥法处理发酵液样品,能降低预处理的样品损失率,更有效地去除杂质,在保证准确度和分离效果的同时,减少了发酵液样品量,并降低有机溶剂使用量。从而,为有效地筛选红霉素组分优势菌种和调整控制工艺条件以达到改善红霉素发酵液组分提供了强有力的检测手段。
在对基因工程菌发酵放大研究时,我们发现在原始工艺的基础上很难获得高质量的种子,影响了发酵合成红霉素单位。主要问题有:(1)培养时种子容易形成菌球,(2)菌浓低,发酵液pH居高不下。通过反复的实验和摸索,本文对种子培养中的氮源进行调控,最终发现培养基中含有1.0%的玉米浆,3.0%黄豆粉的情况下,能够有效解决工程菌种子培养时遇到的瓶颈问题。
同时,在50L发酵罐上对基因工程菌进行优化研究时,我们一方面通过对种子质量进行优化控制,另一方面选择氮源中玉米浆为氮源调控切入点,解决了在原始工艺上遇到的菌浓低,产量低等问题。进一步在酶学水平研究玉米浆的可能作用机理,我们发现在发酵培养中加入1.5%的玉米浆能够加强菌体中心代谢酶类的活力,并能促进蛋白酶水解出更多氨基酸供菌体利用,从而比不加入玉米浆的培养基提高了25%左右的红霉素产素水平。此外,我们经过多次重复,跟踪发现工程菌放罐时,发酵液中的组分优势明显,其中,红霉素A占96%以上。