梭鱼SOCS家族基因的克隆与表达分析

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细胞因子信号转导抑制因子(Suppressor of cytokine signaling,SOCS)是免疫系统的重要的负反馈调节因子,在免疫反应中起到重要的调节作用。梭鱼(Liza haematocheila)是一种鲻形目(Mugiliformes)鲻科(Mugilidae)鱼类,具有适应性强、生长发育快、营养丰富等优点,是我国主要的经济鱼类之一,但其应激性较强,在养殖、捕捞、运输、放流过程中极易擦伤、撞伤、脱鳞而导致其免疫力下降,从而引起病原菌侵染而发生疾病。但目前对梭鱼在内的鯔科鱼类的免疫系统了解甚少,对其抗病机理的研究较为缺乏。本研究运用SMART-RACE方法克隆出梭鱼的十个SOCS家族成员的全长序列,分别是SOCS1、SOCS2、SOCS3a、SOCS3b、SOCS4、SOCS5a、SOCS5b、SOCS6、SOCS7和SOCS8。他们的cDNA序列的全长分别为:1568 bp、2155 bp、1991 bp、2997 bp、2390 bp、2600 bp、2133 bp、5287 bp、3476 bp和2165 bp;开放阅读框(ORF)核苷酸序列分别为:636 bp、609 bp、618 bp、687 bp、1188 bp、1638 bp、1695 bp、1611 bp、2553 bp和642 bp;推断分别可编码:211 aa、202 aa、205 aa、228 aa、395 aa、564 aa、545 aa、536 aa、850 aa和213 aa;理论蛋白分子量分别为:24.03 kDa、22.63 kDa、23.42 kDa、25.51 kDa、44.37 kDa、62.29 kDa、60.65 kDa、91.66 kDa、88.69 kDa和23.96 kDa;等电点(PI)为:9.01、8.83、8.80、8.44、8.69、8.95、6.63、6.51、7.06和8.52。多重序列比对结果表明,梭鱼与其他脊椎动物的SOCS家族蛋白共享高度保守的功能结构域,包括SRC同源2域(SH2结构域)和SOCS-box结构域。本研究通过对哺乳类、爬行类、鸟纲类和硬骨鱼的SOCS家族蛋白进行系统发育分析发现:主要分为两大支,SOCS4、SOCS5a、SOCS5b、SOCS6和SOCS7属于第I型亚家族聚为一大支,SOCS1、SOCS2、SOCS3a、SOCS3b和SOCS8属于第II型亚家族聚为另一大支。前者SOCS4、SOCS5a和SOCS5b聚为一小支,SOCS6和SOCS7聚为另一小支;后者SOCS1、SOCS3a和SOCS3b聚为一小支,SOCS2和SOCS8聚为另一小支;在正常生理条件下,在8个组织(鳃,皮肤,肌肉,肝脏,脾脏,头肾,肠和大脑)中均可检测到SOCS家族基因的表达,停乳链球菌感染后发现:SOCS1、SOCS2、SOCS3a、SOCS3b、SOCS4、SOCS5a、SOCS5b、SOCS6、SOCS7和SOCS8的表达水平在不同组织中呈现出不同的表达水平。总之,本研究首次在鲻形目鲻科鱼类梭鱼中鉴定了10个SOCS家族成员,并在革兰氏阳性菌停乳链球菌感染后对其表达谱进行了分析。结果表明,SOCSs在调节组织稳态和对细菌感染的免疫反应中可能具有不同的作用。
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