设施大棚内杀菌剂高频高剂量使用和有机肥大量施用导致杀菌剂在有机肥施用土壤中的残留污染。蚯蚓作为土壤生态系统中的非靶标动物不仅能富集和降解农药残留,而且其肠道是抗生素抗性基因（ARGs）储存与传播的潜在载体。然而,有机肥施用土壤-蚯蚓生态系统中杀菌剂消解与生物富集特征仍缺少相关研究,同时蚯蚓肠道是ARGs研究中一个被忽视的重点,尤其是杀菌剂胁迫下蚯蚓肠道菌群及ARGs的变化规律尚不清楚。本研究以典型杀菌剂多菌灵为目标化合物,以赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）为受试生物,参考设施大棚土壤中多菌灵残留水平和有机肥使用量,在模拟土壤-蚯蚓生态系统中研究了多菌灵在土壤中的消解特征及在蚯蚓体内的富集规律,多菌灵胁迫下蚯蚓酶活性（乙酰胆碱酯酶和过氧化氢酶）变化、蚯蚓肠道微生物群落结构与功能多样性以及抗生素抗性基因响应规律。研究结果为长期施用有机肥的设施农业土壤中农药残留生态风险评价提供更完善的数据,主要研究结果如下:1)有机肥处理改变了土壤-蚯蚓生态系统中多菌灵的消解与生物富集行为。在模拟土壤-蚯蚓生态系统中多菌灵在不同处理土壤中的消解均呈初期快、后期慢的趋势。添加与未添加有机肥土壤中多菌灵消解半衰期分别为19.15～23.49天和33.00～33.16天,表明土壤-蚯蚓生态系统中有机肥处理促进了土壤中多菌灵的消解。暴露处理初期（3～7天）蚯蚓体内多菌灵浓度较高,随着暴露时间延长,蚯蚓富集浓度整体呈下降趋势。土壤中多菌灵处理浓度越高,蚯蚓体内富集浓度越高。2)多菌灵暴露初期刺激蚯蚓乙酰胆碱酯酶（AChE）活性,随着暴露时间延长显著抑制蚯蚓乙酰胆碱酯酶活性;多菌灵处理使蚯蚓过氧化氢酶（CAT）活性呈先上升后保持较高活性的趋势。添加有机肥土壤中2 mg/kg多菌灵处理使蚯蚓肠道微生物Simpson指数和Mc Intoch指数显著上升,而未添加有机肥土壤中多菌灵处理对蚯蚓肠道微生物Simpson指数和Shannon指数没有显著性影响。3)多菌灵暴露处理改变了蚯蚓肠道微生物群落结构组成。在细菌门水平上,蚯蚓肠道优势细菌门主要是Proteobacteria、Firmicutes、Actinobacteria和Bacteroidetes。有机肥处理导致蚯蚓肠道Proteobacteria和Bacteroidetes相对丰度比例降低,Firmicutes和Actinobacteria相对丰度上升;多菌灵暴露下蚯蚓肠道Proteobacteria相对丰度下降,而Firmicutes和Actinobacteria相对丰度上升。在细菌属水平上,未添加有机肥土壤中多菌灵暴露处理降低了蚯蚓肠道中优势细菌属Rhodococcus、Streptococcus、Myroides和Bacillus相对丰度;添加有机肥土壤中多菌灵处理增加了蚯蚓肠道中Streptomyces相对丰度,但降低了Myroides相对丰度。4)宏基因组和荧光定量PCR法分析均表明多菌灵暴露处理促进了蚯蚓肠道微生物ARGs丰度的上升。添加有机肥土壤中2 mg/kg多菌灵胁迫下蚯蚓肠道中ARGs相对丰度比对照蚯蚓肠道增加了110.74%～226.24%,未添加有机肥土壤中多菌灵胁迫下蚯蚓肠道中四环素类、利福霉素类和糖肽类ARGs相对丰度比对照蚯蚓肠道增加了6.05%～33.89%。有机肥处理土壤中蚯蚓肠道中多药类、四环素类、利福霉素类、氨基香豆素类、氨基糖苷类、肽类和其他类ARGs相对丰度均高于未添加有机肥处理。多菌灵处理导致蚯蚓肠道中sul1、muxB、acrB、vanRO和vanSO基因绝对丰度的上升,2 mg/kg多菌灵处理诱导蚯蚓肠道中sul1、ceoB、muxB、vanSO和mexF基因绝对丰度的显著上升。有机肥处理土壤中蚯蚓肠道内sul1、vanRO、mex K、muxB、acrB和vanSO基因绝对丰度均高于未添加有机肥处理。