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乳腺癌已成为女性发病率最高的恶性肿瘤,占女性全部恶性肿瘤发病的16.8%。中国人口协会发布的《中国乳腺疾病调查报告》显示:我国城市中乳腺癌的死亡率增长了38.91%,其发病呈年轻化趋势,严重威胁女性健康。雌激素受体(estrogen receptor,ER)介导的信号通路在乳腺癌的发生、发展、浸润和转移过程中发挥着重要作用。雌激素与雌激素受体结合后,不但可以通过基因组信号通路与靶基因上的雌激素反应元件结合,促进靶基因转录,还可以通过非基因组信号通路快速激活下游丝裂原活化蛋白激酶(migoten-activated protein kinases,MAPKs)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)通路,影响细胞增殖与凋亡。乳腺癌的发生往往伴随着患者免疫系统低下,抗癌药物毒副作用不仅会影响患者免疫系统发挥正常生理功能,而且易产生多药耐药,给乳腺癌治疗带来一定的困难。中药具有毒副作用低、抗癌效果好、调节免疫力等功效,近年来成为研究的热点。香豆素是具有苯并α吡喃酮母核的化合物,具有抗癌、提高免疫力、抗病毒、抗氧化、抗骨质疏松、抗菌、抗心律失常等多种生物活性,药用价值广泛。秦皮素属于简单香豆素类化合物,是中药秦皮的有效成分,因其具有抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用是近年来研究的热点。本文以MCF-7细胞为模型,系统的研究了秦皮素抑制MCF-7细胞ERα信号通路的作用机制,以体外分离的小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞为模型,初步研究了秦皮素对免疫的调节作用。具体研究结果如下:1.采用MTT比色法,检测秦皮素对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响,结果显示,秦皮素以时间和剂量依赖方式抑制乳腺癌细胞的增殖。2.采用划痕法,检测秦皮素对MCF-7细胞迁移能力的影响。结果显示,秦皮素能明显抑制MCF-7细胞的迁移。3.采用MTT比色法和流式细胞仪分析,检测秦皮素对E2促MCF-7细胞增殖和抗凋亡作用的影响。结果显示,E2具有促进MCF-7细胞的增殖和抗细胞凋亡作用,秦皮素能抑制E2促MCF-7细胞增殖和抗细胞凋亡的作用,将E2诱导的MCF-7细胞阻滞在G0/G1期。4.采用Western blot方法,检测秦皮素对MCF-7细胞ERα蛋白、E2诱导的靶基因蛋白cyclin D1、Bcl-2及下游MAPK/Erk1/2和PI3K/Akt信号通路的影响。结果显示,秦皮素能降低ERα的表达量、抑制E2诱导的cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达,对下游非基因组信号通路MAPK/Erk1/2和PI3K/Akt均有一定的抑制作用,其中,对MAPK/Erk1/2信号通路抑制作用更明显,说明MAPK/Erk1/2信号通路是秦皮素抗乳腺癌作用的主要靶点。5.采用尼龙毛柱法分离小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞,利用MTT比色法,分析秦皮素对小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖的影响。结果显示,在一定浓度范围内,秦皮素能促进小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。6.采用MTT比色法和中性红吞噬法,检测秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力和吞噬能力的影响。结果显示,秦皮素能提高小鼠腹腔巨噬细胞的代谢活力和吞噬能力。7.采用靶细胞幼生法,检测秦皮素对小鼠NK细胞活性的影响。结果显示,秦皮素能提高小鼠NK细胞的活性。