氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhengjiaxun2010
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目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(adipose-derived stemcells,ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①选择3w大的SD大鼠腹股沟脂垫中分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化离心后置于含5ml10%FBS/DMEM的培养基中培养;选择第三代脂肪干细胞接种于6孔板中待细胞融合到80%换成骨诱导液,每3d换液,诱导7d后行茜素红染色。将脂肪干细胞传代到第三代,以1×105/孔接种到6孔板中,细胞融合到80%换成脂诱导液诱导,7d后行油红O染色。②用含0,2.5,5,10,20,40mmol/L浓度氯化锂的培养基分别作用脂肪干细胞24,48,72h后,以MTT法测定氯化锂对细胞增殖的作用。③脂肪干细胞中加入含0,2.5,5,10,20,40mmol/L氯化锂的成骨培养液中培养7d后测定细胞中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)的蛋白活性;④R T-PCR法检测成骨诱导3d后,不同浓度氯化锂作用7d时脂肪干细胞中β-catenin,GSK3β,AKP的表达。结果ADSCs成骨诱导后茜素红染色阳性;成脂诱导后油红O染色阳性;在体外环境培养下,低浓度氯化锂(2.5,5,10mmol/L)作用于ADSCs时能促进细胞增殖,高浓度氯化锂(20,40mmol/L)抑制细胞增殖,5mmol/L浓度氯化锂比其他浓度组更能有效促进ADSCs增殖;5mmol/L氯化锂能促进ADSCs的AKP的活性,40mmol/L具有明显抑制活性的作用;同时,氯化锂能上调Wnt/β-catenin信号通路内部组分中β-catenin的基因表达,抑制GSK3β的表达以及促进AKP的表达。结论氯化锂在体外对大鼠ADSCs增殖有双重的影响,并且促进AKP活性和ADSCs成骨向分化,具有剂量依赖性。5mmol/L浓度的氯化锂可作为促进大鼠ADSCs增殖和成骨分化的最适浓度。
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