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重症急性呼吸综合征(Severe acute respiratory syndrome,SARS)是由重症急性呼吸综合征病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)引起的一种急性,发热,并伴有呼吸道感染等严重并发症的致死性传染病。该病传播速度快、死亡率高,且尚无有效的抗病毒药物和商业化疫苗。虽然从2004年以来没有新的SARS感染病例报道,但是该病仍然有再次流行的可能,进而严重威胁民众的健康。2019年12月我国湖北省武汉市爆发了由SARS-CoV-2引起的COVID-19疫情,研究表明该病毒是一种类SARS样新型冠状病毒,说明SARS-CoV依然存在突破物种屏障并通过中间宿主传染给人类的潜在危险,因此研发SARS-CoV储备型疫苗对我国防控SARS具有十分重要的意义。SARS-CoV是冠状病毒科(Coronaviridae)、β-冠状病毒属(β-Coronavirus)成员。刺突蛋白(Spike protein,S)是SARS-CoV的跨膜糖蛋白,主要负责与细胞受体结合、诱导病毒与细胞融合以及刺激机体产生免疫应答等,是SARS-CoV最重要的免疫原性蛋白。水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)是弹状病毒科(Rhabdoviridae)、水泡病毒属(Vesiculovirus)成员。VSV作为重组病毒疫苗载体具有很多优点:VSV是一种RNA病毒,其基因组不会整合到宿主细胞中;VSV增殖速度快、滴度高,单次免疫就能产生有效保护;插入的外源基因稳定并且表达效率高;VSV对普通人群的致病性极低,具有较高的安全性。本研究以实验室成功构建的嵌合型VSV反向遗传操作系统为基础,将VSV的嚢膜糖蛋白(Glycoprotein,GP)替换为SARS-CoV S蛋白,成功拯救出重组病毒并分别命名为VSVΔG-SARS和VSVΔG-eGFP-SARS。Western blot和激光共聚焦实验证明重组病毒可以正确表达SARS-CoV S蛋白,间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示重组病毒依赖宿主细胞的细胞受体血管紧张素转换酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)完成入侵,进一步表明SARS-CoV S蛋白在重组病毒中成功表达。通过电镜发现重组病毒呈现弹状病毒的典型形态,同时S蛋白嵌合在重组病毒嚢膜表面。病毒的生长动力曲线结果表明重组病毒的滴度低于亲本毒wtVSV,但仍然可以满足免疫滴度的需要。在小鼠的安全评价实验中小鼠未表现出任何临床症状,初步说明重组病毒对小鼠具有良好的安全性。在免疫效力评价中,首先通过中和试验和ELISA实验证明重组病毒能刺激小鼠产生较高水平的体液免疫,进一步通过ELISPOT实验证明重组病毒也可以诱导恒河猴较强的细胞免疫应答,表明重组病毒具有良好的免疫原性。本研究利用VSV嵌合型反向遗传系统,成功制备了嵌合型重组病毒VSVΔG-SARS和VSVΔG-eGFP-SARS,并利用小鼠和恒河猴对VSVΔG-SARS的免疫原性进行评估,证明该重组病毒具有作为SARS-CoV储备型疫苗的潜在价值,同时也为研发以VSV为载体SARS-CoV-2的疫苗提供了可行性。