论文部分内容阅读
水解单宁酸是一种广泛存在于植物体内的多酚类物质,它具有抗菌、抗氧化等生物学功能,在畜牧业中有抗腹泻、促生长等相关应用报道,是一种潜在的功能性添加剂。但其适口性差,且易被氧化、被胃酸破坏,限制了在饲料中的应用。本试验在体外分析了不同来源单宁酸抗氧化能力的基础上,以“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪为试验对象,研究了包膜单宁酸对断奶仔猪生长性能、养分表观消化率、消化酶活性及肠道功能的影响,并采用16S rDNA测序技术探讨其对肠道菌群结构与功能的影响,旨在为包膜单宁酸在饲料中的应用提供科学依据。选择8.6kg左右的28日龄“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪300头,随机分为五组,每组3个重复,每个重复20头。对照组饲喂玉米豆粕基础日粮(含ZnSO4);包膜单宁酸组在基础日粮基础上分别添加0.1%、0.15%、0.2%包膜单宁酸;氧化锌组用氧化锌替代基础日粮中的ZnSO4,其中锌含量为1600mg/kg。试验期20天,饲养试验结束后,选取生长性能最优的0.15%包膜单宁酸组、对照组和氧化锌组,分别从每个处理组中随机选取6头(每个重复两头),共18头试验猪进行屠宰试验,采集血清、肠黏膜、肠道内容物等样品进行相关指标测定,主要研究结果如下:1.单宁酸的体外抗氧化能力不同来源的单宁酸体外抗氧化能力无差异(P>0.05),且均强于维生素C(P<0.05),栗木单宁酸、五倍子单宁酸、维生素C的羟自由基清除能力IC50分别为0.128mg/mL、0.141mg/mL、0.167mg/mL;ABTS+清除能力 IC50 分别为 0.062mg/mL、0.061mg/mL、0.095mg/mL。2.生长性能与腹泻率与对照组相比,0.15%包膜单宁酸组ADG提升22.2%(P<0.05),F/G降低10.3%(P<0.05),腹泻率降低51.3%(P<0.05),与氧化锌组无明显差异(P>0.05);0.2%包膜单宁酸组ADG提升23.6%(P<0.05),F/G无显著差异(P>0.05),腹泻率降低29.7%(P<0.05);0.1%包膜单宁酸组与对照组均无显著差异(P>0.05)。根据以上结果可得出0.15%为本试验中的最适添加量。3.养分表观消化率与消化酶活性与对照组相比,包膜单宁酸组粗蛋白消化率显著提升(P<0.05),且与氧化锌组无差异(P>0.05);其余物质消化率与对照组无差异(P>0.05);胰腺和十二指肠胰蛋白酶活性均上升(P<0.05),略微高于氧化锌组;空肠黏膜麦芽糖酶与蔗糖酶活性上升(P<0.05),与氧化锌组无差异(P>0.05)。4.肠道形态与功能与对照组相比,包膜单宁酸组十二指肠、空肠、回肠绒毛高度、绒隐比均明显提高(P<0.05),与ZnO组相比无差异(P>0.05);电镜下,包膜单宁酸组与氧化锌组比对照组绒毛完整,微绒毛更整齐致密,线粒体结构完整,且包膜单宁酸组空肠微绒毛形态优于氧化锌组;包膜单宁酸组血清二胺氧化酶与内毒素低于对照组(P<0.05),与氧化锌组无差异(P>0.05);包膜单宁酸组ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05),其中ZO-1与Claudin-1的相对表达量显著高于氧化锌组(P<0.05)。5.肠道菌群α多样性:包膜单宁酸组组的菌群多样性指数Simpson、Shannon显著高于氧化锌组(P<0.05),与对照组无差异(P>0.05)。菌群结构:门水平上,三组厚壁菌门与拟杆菌门为绝对优势菌门;科水平上,包膜单宁酸组与氧化锌组中相对丰度最高的为瘤胃球菌科,其次为毛螺旋菌科,而对照组中瘤胃球菌科的相对丰度低于毛螺旋菌科。LEfSe差异分析显示,在属水平,与对照组相比,包膜单宁酸组的粪杆菌属、粪肠杆菌属、氨基酸球菌属、甲烷史密斯菌属、Turicibacter等显著增加(P<0.05);与氧化锌组相比,包膜单宁酸组的粪杆菌属、拟普雷沃菌属、罗氏菌属、巨型球菌属等增加(P<0.05),土孢杆菌属、Faecalicoccus、嗜胆菌属等减少(P<0.05)。PICRUSt分析肠道菌群预测功能:与对照组相比,包膜单宁酸组“丁酸盐代谢”、“丙酸盐代谢”、“色氨酸代谢”、“紧密连接”、“丙酮酸代谢”、“脂肪酸代谢”、“ABC转运蛋白”、“复制、重组和修复蛋白”等相关基因丰度显著上升(P<0.05);“脂多糖生物合成”功能显著降低(P<0.05)。6.血清和肝脏抗氧化能力及生化指标与对照组相比,包膜单宁酸组与氧化锌组血清与肝脏T-AOC、T-SOD活性、GSH-PX活性明显上升(P<0.05),MDA含量明显下降(P<0.05);包膜单宁酸组与氧化锌组无差异(P>0.05)。碱性磷酸酶活性增强(P<0.05),尿素氮含量下降(P<0.05),与ZnO组相比无差异(P>0.05)。而氧化锌组谷丙转氨酶活性相比包膜单宁酸组下降(P<0.05)。上述结果表明:包膜单宁酸能明显提高仔猪日增重,降低料重比,降低腹泻率,提升抗氧化能力;改善绒毛和微绒毛形态及细胞连接,增强肠道屏障功能;提高粗蛋白消化率和胰蛋白酶与空肠二糖酶活性;改变肠道菌群结构,增加产丁酸菌和其他有益菌的丰度,提高“丁酸盐代谢”、“丙酸盐代谢”、“紧密连接”等功能相关基因丰度;本试验中包膜单宁酸的最适添加量为0.15%。结果提示,包膜单宁酸在促进生长、减少腹泻率方面与高剂量氧化锌有同等功效,并在肠道屏障功能与肠道菌群结构与功能改善方面优于氧化锌。