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Bt25是我国自行分离的对小菜蛾具有高毒力的苏云金芽孢杆菌，经PCR-RFLP系统鉴定它含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法，设计一对特异引物，以Bt25质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因。序列测定结果表明该基因编码区为3552bps，编码1183个氨基酸，分子量为133.7kDa，等电点为pI4.755。该基因序列已在GenBank注册，Accession number为AY197341，并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa14。在氨基酸序列918～1180间，和以知的13种cry1Aa的11种（不包括cry1Aa9和cry1Aa13）存在22或23个氨基酸的差异（其中1094～1097的4个氨基酸无对应序列），而这段区域和cry1Ab氨基酸序列的对应区域无差异。cry1Aa14全长基因插入Bt表达载体，获得了重组表达质粒pBYB1，转化大肠杆菌SCS110和Bt无晶体突变株HD73cry-，经过抗性筛选、DNA酶切分析和PCR检测，证实转化成功。SDS-PAGE分析表明该基因在受体菌HD73cry-中能正常表达133kDa蛋白。杀虫生测结果表明cry1Aa14表达产物对小菜蛾幼虫具有毒杀作用，LC50为0.633μg／mL。 Bt-E.coli穿梭载体pHT315去除Bt复制区，构成了一个具有红霉素和氨苄抗性，同时具有多克隆位点的只能在E.coli中复制的载体，命名为pHT315-1。利用pHT315-1，通过部分酶切建库的方法，从近10000个重组子中得到1个Bt复制区。序列测定结果表明该复制区为5273bps，已在GenBank注册，Accession number为AY278324。GenBank核酸序列Blast表明该复制区部分序列与Bt菌株HD263的复制区ori43编码复制蛋白的序列同源性为98％。进一步序列分析表明该复制区至少有3个较大的ORF，分别编码501，333，183个氨基酸。其中ORF1蛋白序列与HD263复制蛋白ORI43的同源性为98％，而另外两个ORF和GenBank己公布的Bt复制相关蛋白无同源性。30℃连续培养72h，复制区质粒在Bt无晶体突变株HD73cry-中稳定性达98％以上，30h生长曲线也表明该复制区能够在Bt中稳定复制和遗传，对受体菌株无明显不良影响。