【摘 要】
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苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM分离自新疆的和田苜蓿,能够在含0.6mol/LNaCl的FY基本培养基中生长.通过Tn5-1063a突变得到042BM的转座子插入突变株,从3000多个
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苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM分离自新疆的和田苜蓿,能够在含0.6mol/LNaCl的FY基本培养基中生长.通过Tn5-1063a突变得到042BM的转座子插入突变株,从3000多个突变株中筛选到盐敏感突变株042BM-X1和042BM-X2.耐盐性实验表明,它们都不能在含0.4mol/L NaCl的固体FY培养基和0.5mol/L NaCl的液体FY培养基上生长.Southern杂交结果显示,Tn5在突变株基因组中以单拷贝形式插入,表明突变株的耐盐性下降与Tn5插入突变有关.使用质粒自连法克隆了042BM-X1和042BM-X2中Tn5插入位点的侧翼序列.通过EcoRI酶切突变株基因组,得到完整的Tn5(含有在大肠杆菌中起始复制的oriV)及其侧翼的序列片段,该片段自连后转化大肠杆菌,以Tn5两端已知的序列设计引物进行测序.BLAST的分析测序结果表明,042BM-X1和042BM-X2中Tn5分别定位在苜蓿中华根瘤菌1021染色体上SMc02682和SMc00419基因内部,该实验证明它们和042BM耐盐相关,命名为rst-Ox1和rst-Ox2基因.rst-Ox1基因的功能未知,而rst-Ox2基因和热带根瘤菌谷胱甘肽合成酶基因gshB有很高的同源性.PCR扩增得到包含启动子的042BM rst-Ox1和rst-Ox2基因的全长.序列测定和BLAST分析表明,它们和苜蓿中华根瘤菌1021的相应基因有99﹪同源性,042BM的rst-Ox1基因功能未知,而rst-Ox2基因和热带根瘤菌谷胱甘肽合成酶基因gshB有81﹪同源性.从外源加入谷胱甘肽,能够部分恢复042BM-X2耐盐性,推测谷胱甘肽通过调节细胞内的钾离子浓度,在苜蓿中华根瘤菌042BM渗透胁迫反应中起重要作用.
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