果蝇Roadkill基因的抗体制备和功能的初步研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huohuoshan000
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Hedgehog信号通路在生物的发育中具有非常重要的作用。在果蝇眼睛发育中,基因Roadkill(Rdx)主要是通过与Hedgehog信号通路的下游转录因子Ci结合,从而特异性的降解Ci,使Hedgehog的靶基因不能进行激活,进而对Hedgehog进行负反馈调节。  为了进一步的研究基因Rdx在发育中的功能,本论文首先选取了一段Rdx基因进行扩增,并将其与载体pGEX-4T-1和pET30a进行重组,分别得到融合蛋白GST-Rdx-ag和His-Rdx-ag。由于融合蛋白为不可溶蛋白,我们利用尿素溶解法来得到可溶的抗原,并将抗原进行家兔免疫,获得Rdx的多克隆抗体。利用融合蛋白His-Rdx-ag来对抗体血清进行纯化,然后对抗体进行蛋白免疫印迹检测和免疫荧光检测。检测结果表明:本论文制备的Rdx抗体能够特异性的识别内源性和外源性的Rdx蛋白。  通过查阅文献,我们知道基因Rdx在果蝇的眼睛和翅膀中均有功能,特别是在果蝇眼睛中的作用非常明显。利用实验室建立好的肠干细胞研究模型,我们通过构建Rdx的RNAi和过表达的转基因果蝇并与工具蝇esgts杂交来分析基因Rdx在果蝇肠干细胞中的功能。实验结果表明,通过对Rdx基因进行RNA干扰,能够少量增加果蝇肠干细胞的增殖。同样的,在果蝇肠干细胞中对Rdx基因进行过表达也可以少量的增加肠干细胞的增殖,故不能断定Rdx是通过调节Ci来影响肠干细胞的增殖,具体的作用机制还需要进一步研究。  综上所述,本次论文不仅成功制备出Rdx抗体,同时发现对果蝇肠干细胞的增殖有一定的影响但是不能确定是通过什么作用机制来影响的,本次研究为进一步研究Rdx基因的功能奠定了一定的基础。
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