【摘 要】
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肝脏是脂质代谢的重要器官,当脂质代谢紊乱,脂肪的摄入或合成超过脂肪的代谢或降解时,会造成肝细胞的脂质积聚。肝脏脂质积聚是肝脏发生病变,进而发展成非酒精性脂肪肝等肝脏疾病的重要诱因。自噬是指依靠溶酶体的酸性环境,将胞内的受损细胞器、营养素和毒素等进行分解,从而实现细胞内细胞器和营养物质的相对平衡。此外,细胞自噬也是降解类脂,保持细胞内脂质平衡的重要途径之一。脂滴（LDs）是动态的细胞器,也是肝细胞贮
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肝脏是脂质代谢的重要器官,当脂质代谢紊乱,脂肪的摄入或合成超过脂肪的代谢或降解时,会造成肝细胞的脂质积聚。肝脏脂质积聚是肝脏发生病变,进而发展成非酒精性脂肪肝等肝脏疾病的重要诱因。自噬是指依靠溶酶体的酸性环境,将胞内的受损细胞器、营养素和毒素等进行分解,从而实现细胞内细胞器和营养物质的相对平衡。此外,细胞自噬也是降解类脂,保持细胞内脂质平衡的重要途径之一。脂滴（LDs）是动态的细胞器,也是肝细胞贮存脂质的主要形式,自噬可通过降解LDs来减少肝细胞中脂质的积聚,维持细胞内脂质平衡。以人参皂苷为代表的固醇类化合物是人参的主要活性物质,这其中人参皂苷Rb1含量最高,在心血管、内分泌、免疫系统和神经保护中发挥药用价值。本文研究了人参皂苷Rb1对HepG2细胞脂质积聚的影响,并确定其作用机制。本文的主要研究内容和结果如下:（1）人参皂苷Rb1缓解HepG2细胞的脂质积聚通过MTT实验确定棕榈酸和人参皂苷Rb1的最大无毒剂量分别为250μM和100μM。采用油红O染色法对HepG2细胞中的脂滴进行染色,通过对比观察人参皂苷Rb1对脂质积聚的缓解作用。使用细胞内总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）试剂盒检测细胞内TC和TG含量,发现人参皂苷Rb1可以显著减少棕榈酸诱导的HepG2中TC和TG的增加,并以50μM的人参皂苷Rb1效果最显著。这表明人参皂苷Rb1可以缓解HepG2细胞的脂质积聚。（2）人参皂苷Rb1促进自噬缓解棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚通过MDC染色发现,棕榈酸和人参皂苷Rb1可以显著促进自噬小体的产生,透射电镜的观察验证了MDC染色的结果,且观察到棕榈酸诱导了HepG2细胞的脂质积聚,添加人参皂苷Rb1后,脂滴数量有所下降。LC3与p62的蛋白表达水平可以表示自噬小体的生成和降解水平,棕榈酸的添加可以上调LC3和p62的表达,即促进自噬小体的生成但抑制自噬小体的降解。人参皂苷Rb1的添加可以下调p62蛋白的表达,促进自噬流;添加氯喹（CQ）后,人参皂苷Rb1对自噬流的促进作用被抑制。腺病毒转染结果与Western blot结果一致。通过LC3-脂滴共定位进一步验证人参皂苷Rb1缓解脂质积聚否与自噬有关,棕榈酸诱导LDs和自噬小体同时增加,大量脂滴被自噬小体包裹,共定位良好;人参皂苷Rb1添加后脂滴减少,共定位降低;CQ可以抑制人参皂苷Rb1的缓解作用,这表明人参皂苷Rb1可促进自噬,进而缓解HepG2细胞的脂质积聚。（3）人参皂苷Rb1通过调控TFEB促进自噬进而缓解棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚。TFEB是自噬后期降解的重要调控因子,通过Western blot实验发现,棕榈酸抑制TFEB的核易位,这与p62蛋白表达升高的结果一致;人参皂苷Rb1的添加可以恢复被棕榈酸抑制的TFEB的蛋白表达。通过q PCR实验,表明人参皂苷Rb1可以恢复被棕榈酸抑制的TFEB及其下游基因的转录水平。姜黄素C1是目前发现的一种,可以特异性促进TFEB表达却不影响m TOR表达的生物活性物质,在促进TFEB表达来看,发现姜黄素C1与人参皂苷Rb1效果相似,在降脂效果上,姜黄素C1同样可以减少HepG2细胞内TC和TG的含量。综上所述,人参皂苷Rb1可以缓解棕榈酸诱导的HepG2细胞的脂质积聚,作用机制可能是人参皂苷Rb1通过TFEB促进自噬,进而增强自噬流来促进脂质降解有关。
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