研究背景：近年来,国内外学者为了降低肝癌的复发率和死亡率,在探索有效的治疗方法和改善患者的预后方面上进行了大量的研究,并取得了一定的成果,但肝癌的远期存活率仍不理想。在采用诸多的治疗方法对肝癌预后改善都不明显的情况下,中医药对肝癌的疗效得到人们的日益认可,并成为了当前抗癌研究的热点之一。泽漆是一种广泛分布于我国的传统中草药,其对肝癌、食管癌、鼻咽癌等的疗效在古籍中均有记载。现代药理学研究表明泽漆根的水提取物在体内、外均能抗癌,而从泽漆中分离出的许多单体物质均有抗癌活性,如槲皮素苷、山奈酚、羽扇豆醇、没食子酸及金丝桃苷等的体外抗肿瘤作用已证实。当前,我们对泽漆的化学成分和抗癌活性已做出了大量的研究,并发现其乙酸乙酯提取物对肝癌细胞的体外生长有显著抑制和诱导凋亡的作用。然而,要实现泽漆抗肿瘤作用的临床价值,就得进一步明确其对体内肿瘤生长的抑制作用及其机制,因此,泽漆乙酸乙酯提取物埘体内肝癌的生长抑制和作片J机制研究是开发和利用泽漆必需的实验依据。目的：进一步明确泽漆乙酸乙酯提取物的体内抗肝癌作用,并探讨泽漆乙酸乙酯提取物抑制肝癌体内生长的作用机制。探索泽漆抗肿瘤的作用靶位,为泽漆抗肝癌的临床前试验做准备。方法：采用系统溶剂法分离并提纯泽漆的化学组分后,选择组分中乙酸乙酯提取物作为实验所用试剂。选SMMC-7721, BEL-7402, MHCC97三株人肝癌细胞培养,将84只裸鼠先随机分成SMMC-7721组、BEL-7402组、MHCC97组,然后每个组再分成对照组、5-Fu200μg/mL组、泽漆乙酸乙酯提取物(EAE)50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL5个亚组,其中对照组4只裸鼠,其余各组均6只裸鼠,SPF环境饲养。各组裸鼠颈部皮下接种对数生长期细胞构建荷瘤模型。移植瘤模型成功后腹腔注射5-Fu和不同浓度的EAE处理,每天1次,连续30天,对照组给予5-Fu和EAE稀释液生理盐水处理。腹腔注射处理后观察移植瘤生长和体积变化,并测量记录其长径(a)和短径(b),每5天1次,体积大小按V=ab2/2计算。6周后处死裸鼠,并剥离移植瘤收集组织标本,将所得标本按不同实验要求保存,福尔马林固定：HE染色和免疫组织化学法检测移植瘤中CyclinDl, Caspase-3, bax, bcl-2, nm23-H1和MMP-9的表达；2.5%戊二醛固定：透射电镜下观察超微结构：液氮冻存：免疫印记(Western Blotting, WB)检测肿瘤组织中的CyclinD1, bax, bcl-2, Caspase-3, nm-23H1和MMP-9蛋白的表达。结果：在移植瘤中,与对照组相比较,EAE处理后的瘤体积明显减小(P<0.05),差异有统计学意义,且呈现出了移植瘤体积随EAE浓度增加逐渐变小的趋势,但这种明显的变化趋势仅在单株细胞实验组内的各浓度间(P<0.05),而细胞株间各的实验组相比较并不明显(P>0.05)。免疫组织化学检测发现,与对照组相比较, EAE处理组移植瘤中CyclinD1, bcl-2和MMP-9在胞浆内的着色程度下降和显色的绌胞数目明显减少,而bax, Caspase-3和nm23-H1则出现着色程度加深和显色的细胞数目明显增加。透射电镜观察发现,与对照组相比较,EAE处理组超微结构变化明显,在细胞内部形态学的主要变化为：EAE低浓度组出现细胞核固缩、染色质凝聚、线粒体及细胞器肿胀；随着EAE浓度增大则出现染色质边集、核周隙增宽、细胞问纤维组织增生、细胞内出现凋亡小体；EAE高浓度组可见细胞核碎裂、溶解,形成大片的空泡。Western blotting检测发现：与对照组相比较,CyclinD1蛋白表达在EAE处理组内减少(P<0.05),且出现了随EAE浓度增加而表达量逐渐减少的趋势；与对照组比较,EAE处理组中bcl-2蛋白表达减少(P<0.01),随EAE浓度增加蛋白表达显著减少,且EAE200μg/mL组中低于5-Fu组(P<0.05),差异有显著性,而bax和Caspase-3蛋白表达在EAE处理组明显高于对照组(P<0.01),呈现出与EAE浓度梯度的正相关,其中在EAE100μg/mh和EAE200μg/mL组中高于5-Fu组(P<0.05)；与对照组比较,MMP-9蛋白表达在EAE处理组明显减少,而nm23-H蛋白表达明显增加,并且都呈现出剂量依赖性。以上蛋白表达的变化仅在EAE处理的细胞株移植瘤组内存在差异,而在细胞株移植瘤组问变化不明显(P>0.05)。结论：1.EAE能抑制肝癌细胞的体内生长,其抑制作用呈现剂量-依赖性。2.EAE能下调CyclinD1, bcl-2和MMP-9蛋白在肝癌细胞I内J的表达,上调bax,Caspase-3和nm23-H1蛋白表达。3.抑制生长、诱导和促进凋亡、减弱侵袭和转移可能是EAE对体内肝癌细胞的作用机制。