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目的在孕11-13+6周超声、母血清生化学指标联合筛查基础上,应用母血中游离胎儿核酸及蛋白质组学方法探索胎儿染色体非整倍体异常的产前筛查与无创诊断方法,以解决临床中胎儿非整倍体异常筛查时间晚、检出率低及有创性的缺陷。方法1.选取2010年1月1日至2011年12月31日间在我院进行检查的孕11-13+6周孕妇共5000例,超声检测胎儿颈项透明层厚度(NT)、是否存在鼻骨(NB)、三尖瓣反流(TR)及静脉导管血流异常(DV),同时取妊娠妇女静脉血,以时间分辨法检测母血清中妊娠相关蛋白A (PAPP-A)和游离β绒毛膜促性腺激素(Fβ-hCG)水平,所得数据输入数据库,并根据患者年龄、体质量、种族、吸烟史、妊娠方式、妊娠周数等转化成该指标的中位数倍数,使用软件,计算出妊娠妇女的风险值。风险界值为1：270。2.204例筛查高风险的孕妇,其中35例行经腹绒毛活检,161例孕20周行羊膜腔穿刺羊水细胞核型分析,2例Rh阴性血型直接行cffDNA检测,未进行绒毛活检或羊水穿刺,6例选择终止妊娠者,其流产物行FISH检测。3.35例行经腹绒毛活检的孕妇同时通过高通量测序技术检测母血浆中细胞游离胎儿DNA (cffDNA)。其中共发现6例胎儿为染色体核型异常,包括2例21-三体综合症,选取这2例21-三体胎儿和14例正常胎儿孕妇的血浆,应用数字PCR技术行细胞游离胎儿RNA (cffRNA)单核苷酸多态性检测。4.选取5例21-三体胎儿与4例正常核型胎儿孕妇血浆,以Isobaric标记在母血浆中寻找21-三体胎儿的差异蛋白。结果1.5000例孕妇中,正常核型胎儿4983例,异常核型17例,其中21-三体9例,18-三体2例,13-三体1例,Turne综合征4例,三倍体1例。2.筛查高风险204例,21-三体检出率89%,假阳性率2.3%。3.9例21-三体胎儿中有5例为鼻骨缺失(55.6%)、5例为三尖瓣反流(55.6%)、4例为静脉导管a波反向(44.4%)、3例胎儿鼻骨缺失伴有三尖瓣反流及a波反向(33.3%)。4.核型正常而有先天性心脏病的胎儿中80%存在三尖瓣反流,75%存在静脉导管a波反向。5.35例孕妇行母血浆cffDNA检测,检出6例核型异常,包括2例21-三体、1例18-三体、1例13-三体及2例45X0,均与绒毛取样细胞核型分析结果一致。6.检测2例21-三体综合征及14例正常核型胎儿孕妇的血浆PLAC4RNA-SNP等位基因G/A比率,未检出胎儿染色体异常(1.055vs1.00,P>0.05)7.21-三体胎儿与正常核型胎儿孕妇血浆中共发现29个差异蛋白。结论1.孕11-13+6周胎儿非整倍体异常联合筛查检出率高,假阳性率低,可以进一步推广应用。2.孕11-13+6周联合筛查增加三项超声标记物有望增加胎儿非整倍体异常检出率,但需要扩大样本量进一步研究。3.孕11-13+6周超声标记物异常(NT、TR和DV)可作为胎儿先天性心脏病预测指标。4.经母血cffDNA检测胎儿染色体非整倍体异常方法可行,具有很好的阴性预测价值,可以作为特殊人群的一种产前筛查和诊断手段。5.母血浆差异蛋白及cffRNA检测可作为新的生物标记物进行产前诊断,但尚需进一步扩大样本量。