七种草食性动物粪便免培养细菌与纯培养放线菌多样性及其生物活性的研究

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耐药性、新的疾病、超级细菌盛行的当下,如何快速、有效的寻找到有用的生物活性物质,进一步开发成药物,是目前人类面临的最大挑战。动物粪便放线菌是一类开发较少的资源,本研究以7种草食性动物粪便为材料,利用高通量测序技术与纯培养方法结合对动物粪便放线菌进行研究,以发现放线菌资源和有应用价值潜力菌株为出发点,研究各样品中放线菌多样性以及对分离的放线菌菌株一些生物活性进行筛选。本文首先通过高通量测序手段,对7种草食性动物粪便(水鹿、犀牛、亚洲象、长颈鹿、羊驼、角马以及斑马)中细菌16S rRNA基因V4区进行测序,共获得442,470条有效序列,近2,463个OTUs,鉴定出变形菌门(Proteobacteria)、厚壁门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、蓝藻菌门(Cyanobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)等17个门细菌,上百个科属。其中水鹿、犀牛、亚洲象、长颈鹿、羊驼、角马及斑马中放线菌所占总量比重分别为2.0%、1.0%、1.0%、9.0%、14.0%、4.0%和1.0%。随后,通过不同分离方法和培养基的选择,分离放线菌菌株。一共分离得到525株放线菌,分属于2个亚纲,2个目,20个科,36个属。其中包含了多株潜在新分类单元菌株,通过放线菌多相分类方法,鉴定YIM 101269为Tessaracoccus属中的新种菌株,命名为Tessaracoccus rhinocerotis sp. nov。最后,对分离到的525株放线菌进行抗菌活性、功能基因以及纤维素酶、角蛋白酶活的筛选,得到57株抗枯草芽孢杆菌、74株抗金黄色葡萄球菌、56株抗大肠杆菌、74株抗结核分枝杆菌、50株抗白色念球菌和54株抗黑曲霉,349株检测PKS-Ⅰ、PKS-Ⅱ、NRPS、CYP、SAL和AHBH基因,179株具有纤维素酶活性,124株具有角蛋白水解能力。肠道环境的特殊性,可能引起粪便放线菌菌株一些基因的碱基出现替换、增加或者缺失,从而使得动物粪便放线菌较其他环境条件下分离得到的放线菌菌株,在功能、代谢等方面更有特异性,如何保护好、利用好这些放线菌资源需要人类共同的努力。
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