【摘 要】
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目的通过采用睫状神经营养因子（CNTF）复合小分子化合物（毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤,Fsk-IBMX）对肌源性干细胞（MDSCs）进行体外分步诱导,检测不同诱导分化阶段细胞表型的变化,同时探讨c AMP信号通路在诱导分化过程中的作用及意义,以期为MDSCs分化为雪旺细胞（SCs）表型补充理论和研究基础,并对作用机制进行完善。方法采用混合消化酶从一周龄SD大乳鼠后肢骨骼肌中提取MDSCs,
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目的通过采用睫状神经营养因子（CNTF）复合小分子化合物（毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤,Fsk-IBMX）对肌源性干细胞（MDSCs）进行体外分步诱导,检测不同诱导分化阶段细胞表型的变化,同时探讨c AMP信号通路在诱导分化过程中的作用及意义,以期为MDSCs分化为雪旺细胞（SCs）表型补充理论和研究基础,并对作用机制进行完善。方法采用混合消化酶从一周龄SD大乳鼠后肢骨骼肌中提取MDSCs,并用差速贴壁法进行纯化,运用细胞免疫荧光对其进行鉴定,并用CCK-8法检测各代MDSCs在不同培养时间点的增殖活性改变,以CNTF复合Fsk-IBMX对MDSCs进行体外分步诱导,其中去分化过程实验分组及处理方法为对照组（去分化培养基处理72h）、去分化组（去分化培养基+CNTF处理72h）、抑制组（去分化培养基+CNTF+SQ22536处理72h）,每24h更换一次培养基;SCs样分化过程实验分组及处理方法为对照组（神经生长培养基处理120h）、诱导组（神经生长培养基+Fsk+IBMX处理120h）、抑制组（神经生长培养基+Fsk+IBMX+SQ22536处理120h）,每60h更换一次培养基。通过细胞形态学、CCK-8、Western Blot、RT-q PCR等技术对去分化细胞和SCs样细胞进行鉴定及相关分析,同时检测去分化过程和SCs样分化过程中c AMP信号通路相关蛋白的表达情况。结果细胞免疫荧光染色显示取自一周龄SD大乳鼠后肢骨骼肌的原代细胞能够被MDSCs特异性标志物之一Desmin标记,CCK-8结果显示在相同培养时间点,P1～P3 MDSCs增殖活性逐渐增加（P<0.0 001）,P3～P8 MDSCs增殖活性趋于稳定,Western Blot结果显示CNTF诱导后成肌分化相关蛋白p21和Myo G表达降低（P<0.05;P<0.01）,c AMP相关蛋白p-CREB表达增加（P<0.001）,Fsk-IBMX诱导后SCs特异性标志物S100β、GFAP和p75以及p-CREB表达均增加（P<0.05;P<0.05;P<0.05;P<0.01）,而c AMP抑制剂SQ22536可以抑制CNTF和Fsk-IBMX的作用,且诱导后Desmin的表达水平明显降低（P<0.01）。RT-q PCR的结果与Western Blot结果一致,即Fsk-IBMX诱导后S100β、GFAP和p75 m RNA表达水平增加（P<0.001;P<0.001;P<0.0 001）,而SQ22536可以抑制这一效应（P<0.01;P<0.001;P<0.0 001）。CCK-8结果显示CNTF复合Fsk-IBMX诱导后细胞的活性有所降低（P<0.0 001）。结论CNTF复合Fsk-IBMX可以诱导MDSCs分化为SCs表型,并且CNTF诱导的去分化过程和Fsk-IBMX诱导的SCs样分化过程均激活了c AMP信号通路。
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