南瓜籽蛋白制备及其活性多肽的研究

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本文以南瓜籽为研究对象,用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂,研究饼粕中蛋白质的提取工艺和功能性质,制备活性多肽的酶水解工艺,以及超滤技术对酶解液的分级分离过程,同时分别用SDS-PAGE凝胶电泳技术和凝胶柱层析技术分析南瓜籽蛋白和多肽的分子量分布情况,并通过体外实验初步评价南瓜籽酶解液的抗氧化活性和降血压活性,得到如下结论:1、碱溶酸沉淀法提取南瓜籽蛋白的最佳工艺条件是:温度为50℃,料液比为1:30,pH值为11,浸提时间为1.5h。在此条件下蛋白质的提取率达到85.52%,纯度为91.07%。南瓜籽蛋白的第一限制性氨基酸为含硫氨基酸,其次为赖氨酸,必需氨基酸指数高达0.8687,是一种良好的蛋白资源。2、南瓜籽蛋白的溶解度随pH变化呈V型曲线,在pH为5.0-6.0时溶解度最小;吸水性和吸油性都在1.2~1.6g/g左右;乳化能力在适宜pH下达到80%以上;起泡性则相对较弱。南瓜籽分离蛋白的SDS-PAGE电泳得到至少7条谱带,分子量主要分布在35KDa、45KDa左右以及25KDa以下。3、采用Plackett-Burman实验设计结合响应面优化酸性蛋白酶制备南瓜籽抗氧化肽的工艺条件,最终确定水解条件为:温度50℃、水解pH 2.5、水解时间5 h、底物浓度0.05 g/mL、加酶量6000 U/g,在该条件下得到的DPPH清除率为92.82%。4、通过单因素实验初步确定Alcalase蛋白酶制备南瓜籽降血压肽的最佳工艺参数为:加酶量6000U/mL, pH为8,温度为55℃,底物浓度为0.06g/mL,水解时间为4h,此时水解度为12.74%。5、南瓜籽酶解液一次超滤的工艺参数为:操作压力0.25MPa、料液浓度为3%、料液pH为7,操作时间为60min;二次超滤的工艺参数为:操作压力0.2MPa、料液浓度为2%、料液pH为7,操作时间为60min。酸性蛋白酶解液和Alcalase蛋白酶解液经过超滤以后分子量小于4000Da的组分均占到95%以上,且分别具有更强的抗氧化活性和降血压活性。
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