乳腺癌的治疗一直以来是困扰广大学者的难题,中药以其具有较低毒副作用的优势,在治疗乳腺癌中拥有极大潜力,故寻找新型的抗癌中草药是癌症治疗领域的核心科学问题之一。金丝桃苷是一种天然的植物中草药产物,临床中主要用于心血管相关疾病的治疗。此外,金丝桃苷对肿瘤、炎症疾病也有疗效。在对金丝桃苷的研究中发现其可抗氧化损伤,即能通过降低机体内的活性氧水平,发挥保护细胞的作用。核因子-κB家族（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）在免疫当中占据重要地位,同时也是长期的学术研究焦点问题。研究发现在乳腺癌细胞中NF-κB信号通路表达异常,其下游相关因子能抑制乳腺癌细胞生长甚至诱发细胞凋亡。有研究表明金丝桃苷在胰腺癌、肺癌以及前列腺癌的治疗中发挥作用,然而关于金丝桃苷在乳腺癌治疗中的生物学作用仍需进一步研究。因此,本实验旨在探索金丝桃苷对于乳腺癌的作用效果及相关分子机制,通过使用不同浓度梯度的金丝桃苷观察其在乳腺癌细胞和皮下同种移植瘤小鼠模型中的治疗潜力,以期寻找治疗乳腺癌的新药物,为人类以及动物乳腺癌的临床治疗提供帮助。具体实验内容如下:1.体外实验:在在本实验当中选择小鼠、犬以及人的乳腺癌细胞进行实验开展分析,分别为4T1、7364以及MCF-7细胞系。运用CCK-8、细胞划痕实验、RT-q PCR、流式细胞术和蛋白质免疫印迹等方法验证金丝桃苷对于乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡的影响;设置N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）和H2O2对照组通过流式细胞术等方法探究金丝桃苷对乳腺癌细胞内活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平的影响;通过免疫荧光染色和蛋白质免疫印迹实验确定金丝桃苷对NF-κB信号通路的作用机制和对凋亡相关因子表达的影响。2.动物实验:首先建立移植瘤小鼠模型,饲养12 d后,将小鼠随机分为A,B,C三组（5只/组）。随后采用腹腔注射的方式,给予移植瘤小鼠如下的药物每隔一天处理一次:A组生理盐水,B组NAC（100 mg/kg）,C组金丝桃苷（50 mg/kg）,同时称量小鼠的体重,测量肿瘤大小计算出体积。药物处理时间为18 d,用药结束后,安乐小鼠并取出肿瘤组织。移植瘤组织H＆E染色,观察其病理变化,并用蛋白质免疫印迹检测相关蛋白的表达情况。结果:1.通过CCK-8结果能够发现,伴随金丝桃苷浓度的逐渐提升及作用时间的演进,乳腺癌细胞的增殖活力均明显降低。流式细胞术和划痕愈合实验表明随着金丝桃苷浓度的增加,乳腺癌细胞凋亡率升高,迁移速度降低。RT-q PCR结果显示经金丝桃苷处理后细胞内促凋亡相关的m RNA如Bax、XIAP的表达水平升高,而Bcl-2表达下降。流式细胞术发现金丝桃苷能降低细胞内ROS水平。蛋白质免疫印迹结果显示随着金丝桃苷浓度的升高,细胞内促凋亡蛋白表达水平升高,抑凋亡蛋白表达下降;同时金丝桃苷和NAC处理组中细胞内p-IκB-α和p-p65表达降低,在免疫荧光实验中也证实了这个结果。2.小鼠注射4T1细胞7 d后,接种部位长出肉眼可见的肿瘤,12 d后完全成瘤。经过18 d的治疗发现,金丝桃苷治疗组和NAC治疗组的小鼠移植瘤体积显著低于生理盐水处理的对照组。镜下针对移植瘤组织H＆E染色进行观察,结果发现与对照组相比,金丝桃苷治疗组肿瘤组织出现较大的坏死区,并且该区细胞核质均有明显的不可逆凋亡病理现象。肿瘤组织免疫蛋白印迹结果显示抑凋亡蛋白Bcl-2所具备的表达水平被降低,至于促凋亡蛋白Cleaved PARP、Bax以及Cleaved Caspase-3的表达水平则是有所提高。结论:金丝桃苷可以通过降低乳腺癌细胞内ROS水平,在此基础上对NF-κB信号通路的活化进行抑制,进而影响到下游相关抗凋亡和促凋亡因子的表达水平,诱导Bax大量积累,从而导致线粒体功能障碍。同时还可以借助激活Caspase-3等相关因子表达诱导乳腺癌细胞大量凋亡,这样以起到抗癌的作用。因此,金丝桃苷有望成为治疗乳腺癌的新型天然药物化合物。