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背景:玉米赤霉烯酮（ZEA）是一种具有雌激素活性的真菌毒素,主要作用于动物生殖系统,可导致家畜繁殖障碍,对农业和畜牧业造成严重损失;microRNA（miRNA）是真核生物体内一段18-26bp的非编码核苷酸片段,miRNA与机体的发育和生理学过程有着密切联系。目的:本研究主要阐明miRNA是否参与ZEA在生殖细胞中毒理学的调控,并验证ZEA是否通过PI3K/AKT通路引起生殖细胞凋亡。方法:通过CCK-8试剂盒检测ZEA对小鼠睾丸间质细胞的最佳染毒浓度并计算半数致死浓度,建立ZEA对小鼠睾丸间质细胞的细胞染毒模型。通过TUNEL检测ZEA对小鼠睾丸间质细胞的凋亡情况。分别提取空白组和ZEA染毒组的RNA,每组3个重复后进行miRNA测序筛选差异表达的miRNA。通过RT-PCR验证miRNA测序结果。miRNA测序筛选出的PI3K/AKT信号通路通过构建腺病毒载体干扰PTEN基因验证ZEA是否通过PI3K/AKT通路促进小鼠睾丸间质细胞的凋亡,流式细胞术验证小鼠睾丸细胞的凋亡情况。Western-blot验证PI3K/AKT通路中PTEN、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白的变化。结果:1.CCK-8试剂盒显示随着ZEA浓度的提高,小鼠睾丸间质细胞的生长受到抑制,通过计算得出ZEA对小鼠睾丸间质细胞的半数致死浓度为IC50=53.33μmol/L。TUNEL的结果显示当以53.33μmol/LZEA处理小鼠睾丸间质细胞24小时后,小鼠睾丸间质细胞发生明显的凋亡。2.miRNA测序结果显示ZEA处理组和对照组相比,有197个miRNA显著变化（p<0.05）,其中86个上调,111个下调。通过生物信息学对差异表达的miRNA进行靶基因预测并进行GO和KEGG分析,筛选出了16个与ZEA毒理学相关的miRNA并绘制miRNA-靶基因-信号通路互作图。miRNA-靶基因-信号通路互作图表明Ras信号通路,Rap1信号通路,PI3K-AKT信号通路,Foxo信号通路,AMPK信号通路和MAPK信号通路等通路与ZEA毒理学关系密切。之后通过RT—PCR验证miRNA和靶基因,其结果与测序结果一致。3.构建腺病毒载体后,倒置荧光显微镜观察携带GFP荧光增强标签的腺病毒转染情况,判断最适的multiplicity of infection（MOI）为50MOI。Western-blot结果显示腺病毒有效的干扰了PTEN蛋白的表达。流失细胞术的结果表明小鼠睾丸间质细胞中的PTEN蛋白沉默后可抑制ZEA诱导的凋亡。ZEA组的PTEN、Bax蛋白和空白组相比显著上调（p<0.01）。ZEA组的AKT,p-AKT,Bcl-2蛋白和空白组相比显著下调（p<0.05）。NC+ZEA组和ZEA组蛋白表达基本一致。shRNA+ZEA组的PTEN、Bax蛋白和ZEA组相比显著下调（p<0.05）,shRNA+ZEA组的AKT,p-AKT,Bcl-2蛋白和ZEA组相比显著下调（p<0.05）。结论:1、ZEA可以起小鼠睾丸间质细胞的凋亡。ZEA对小鼠睾丸间质细胞的半数抑制浓度为IC50=53.33μmol/L。2、ZEA染毒后TM3 Leydig细胞后有16个miRNA与ZEA的毒理学相关。GO富集分析和途径相互作用分析表明,miRNA和靶基因与ZEN的毒理机制关系密切的通路有:Ras信号通路,Rap1信号通路,PI3K-AKT信号通路,Foxo信号通路,AMPK信号通路和MAPK信号通路等。3、ZEA可能通过对PI3K/AKT信号通路诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡。PTEN蛋白可能是ZEA作用于PI3K/AKT信号通路中一个重要靶点。