论文部分内容阅读
目的:探讨香烟烟雾提取物对巨噬细胞表面Muc1表达的影响,及Muc1对巨噬细胞功能的影响,为阐明慢性阻塞性肺疾病的发病机制提供新的理论依据,对慢性阻塞性肺疾病的预防和治疗提供一个新的靶点。 方法:(1)培养RAW264.7巨噬细胞,分别用0.3%及0.5%香烟烟雾提取物(CSE)刺激3、6、12、24h后,收集细胞蛋白,采用Western-Blot蛋白免疫印迹的方法检测RAW264.7巨噬细胞Muc1的表达水平。提取并培养小鼠原代巨噬细胞,并用0.5%CSE刺激12h后,收集细胞蛋白,采用Western-Blot蛋白免疫印迹的方法检测原代巨噬细胞Muc1的表达水平。(2)饲养并繁殖FVB Muc1杂合型(Muc1+/-)、野生型(Muc1+/+)和纯合突变基因(Muc1-/-)小鼠,并进行基因型的鉴定。提取并培养Muc1+/+和Muc1-/-基因型的小鼠原代巨噬细胞,观察两种基因型的原代巨噬细胞的形态及生长状况。将来源于Muc1+/+小鼠和Muc1-/-小鼠的原代巨噬细胞均分为对照组(CTL)和0.5%CSE组共四组,四组处理后加入适量的鸡红细胞来观察每组吞噬鸡红细胞的能力。原代巨噬细胞分为Muc1+/+组与Muc1-/-组2组进行划痕实验,将来源于Muc1+/+小鼠和Muc1-/-小鼠的原代巨噬细胞均分为对照组(CTL)和MCP-1组共四组并应用Transwell小室进行迁移实验,来观察每组巨噬细胞的迁移情况。 结果:(1)0.3%CSE刺激RAW264.7巨噬细胞3h、6h、12h、24h后分别与对照组相比,Muc1蛋白表达均有上调趋势,但无统计学意义(P>0.05)。0.5%CSE刺激RAW264.7巨噬细胞3h与对照组相比,Muc1蛋白表达有上调趋势,但无统计学意义(P>0.05);0.5%CSE刺激RAW264.7巨噬细胞6h、12h与对照组相比,Muc1蛋白表达增加,并有统计学意义(P<0.05);0.5%CSE刺激24h与对照组相比,Muc1蛋白表达下调,有统计学意义(P<0.05)。0.5%CSE刺激原代巨噬细胞12h与对照组相比,Muc1蛋白表达增加,并有统计学意义(P<0.05)。(2)Muc1+/+原代巨噬细胞的0.5%CSE组吞噬鸡红细胞的能力要弱于Muc1+/+原代巨噬细胞的对照组,并有统计学意义(P<0.05);Muc1-/-原代巨噬细胞的0.5%CSE组吞噬鸡红细胞的能力与Muc1-/-原代巨噬细胞的对照组基本无差异;Muc1-/-原代巨噬细胞的对照组吞噬鸡红细胞的能力有比Muc1+/+原代巨噬细胞的对照组强的趋势,但无统计学意义(P>0.05);Muc1-/-原代巨噬细胞的0.5%CSE组吞噬鸡红细胞的能力要强于Muc1+/+原代巨噬细胞的0.5%CSE组,并有统计学意义(P<0.05)。划痕实验中发现Muc1+/+组巨噬细胞迁移的数目多于Muc1-/-组。迁移实验中发现与Muc1+/+原代巨噬细胞的对照组相比,Muc1+/+原代巨噬细胞的MCP-1组巨噬细胞的迁移率较高;与Muc1-/-原代巨噬细胞的对照组相比,Muc1-/-原代巨噬细胞的MCP-1组巨噬细胞的迁移率较高;与Muc1-/-原代巨噬细胞的对照组相比,Muc1+/+原代巨噬细胞的对照组巨噬细胞的迁移率较高;与Muc1-/-原代巨噬细胞的MCP-1组相比,Muc1+/+原代巨噬细胞的MCP-1组巨噬细胞的迁移率较高。并均有统计学意义(P<0.05)。 结论:香烟烟雾提取物可能增加巨噬细胞表面Muc1的表达。Muc1可能会降低巨噬细胞的吞噬功能。Muc1可能会促进巨噬细胞的迁移。