西地那非通过Akt/GSK-3β信号通路调控小鼠肾纤维化的机制研究

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目的:探讨西地那非(Sil)对小鼠肾纤维化的调控作用,为临床应用Sil治疗肾纤维化提供实验依据。方法:90只昆明小鼠随机分为三组,假手术组(n=30),小鼠仅做输尿管分离,不结扎及剪断输尿管,1ml/10gd给予0.9%NaCl溶液皮下注射;UUO模型组(n=30),小鼠分离及结扎输尿管制备UUO模型;UUO+Sil给药组(n=30),小鼠于UUO模型成功后第1天开始每天同一时间皮下注射西地那(12mg/kg/d),共注射14天。实验第3、7、14天每组随机选择10只,取眼球血测定血清SCr和BUN;取肾组织检测MDA和SOD;HE和Masson染色,观察肾组织的病理改变;采用蛋白免疫印迹法检测肾组织中Akt和GSK-3β蛋白及其磷酸化水平。结果:1.UUO模型组小鼠的Scr、BUN含量明显高于假手术组(P<0.05),给药组小鼠的Scr、BUN含量明显低于UUO模型组(P<0.05)。2.UUO模型组小鼠MDA含量较假手术组增高(P<0.05),给药组小鼠MDA含量较B组降低(P<0.05)。UUO模型组小鼠SOD活性较假手术组活性下降(P<0.05),给药组小鼠SOD活性较UUO模型组小鼠升高(P<0.05)。3.UU03天时UUO模型组与假手术组相比较,可见部分肾小管上皮细胞空泡变性,少量肾小管扩张,伴少量炎性细胞浸润,UUO7天时肾小管上皮细胞萎缩,管腔扩张,间质增宽及较多炎性细胞浸润。UUO14天时上述改变更明显,肾间质成纤维细胞增生和间质纤维化,给药组相比较UUO模型组上述病理改变减轻。4.UUO模型组与假手术组相比较,随时间的延长胶原纤维逐渐增多,UUO3天时,可见小管上皮空泡变性,UUO7天时,部分增宽间质中可见胶原组织,UUO14天时,间质中胶原纤维明显增多,小管上皮受损,细胞红染变淡。给药组较UUO模型组上述表现较轻。5.与假手术组相比较,UUO模型组p-Akt/Akt及p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达水平明显降低(P<0.05),与UUO模型组相比较给药组p-Akt/Akt,p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:1.Sil能减轻肾纤维化引起的肾功能损伤。2.Sil对UUO小鼠肾组织有抗氧化作用。3.Sil对UUO模型肾纤维化有抑制作用,其机制可能与上调Akt/GSK3β的通路相关。
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