PKC途径对激素诱导成骨细胞凋亡作用影响的初步研究

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目的通过地塞米松诱导成骨细胞凋亡,分别给予蛋白激酶C激动剂、抑制剂,检测蛋白激酶C途径对地塞米松诱导成骨细胞凋亡的影响。方法采用酶交替消化法对SD大鼠新生鼠颅骨的成骨细胞进行分离培养,取第三代细胞采用细胞形态观察、茜素红染色观察钙结节形成、碱性磷酸酶含量检测等方法进行鉴定。实验为分A、B、C、D4组,A组为空白组;B组为模型组,用地塞米松诱导细胞凋亡模型;C组为佛波醇组;D组为星型胞菌素组。分别用MTT检测细胞活性,流式细胞仪检测凋亡,酶联免疫检测细胞膜、细胞浆PKC含量变化。数据统计学方法:单因素方差分析、T检验,检验水准P<0.05,采用SPSS13统计软件。结果成功采用酶交替消化法对成骨细胞进行分离培养,细胞经形态观察、钙结节茜素红染色、碱性磷酸酶检测等方法鉴定为成骨细胞。模型组成骨细胞凋亡率(18.632±3.763)较空白组凋亡率(5.071±1.692)显著增加,P<0.05,模型建立。MTT法检测空白组、激素组、佛波醇组、星型孢菌素OD值分别为:0.693±0.061、0.504±0.035、0.655±0.017、0.671±0.030,单因素方差分析,P<0.05,组间T检验,P<0.05。流式细胞仪检测成骨细胞凋亡,空白组、激素组、佛波醇组、星型孢菌素凋亡率分别为:5.071±1.692、18.632±3.763、25.655±2.480、8.334±3.336,单因素方差分析,P<0.05,组间T检验,P<0.05。细胞胞浆与胞膜PKC含量检测,胞浆和胞膜的PKC量在10min时变化最大,30min时几乎恢复,1h时PKC量反向变化。结论PKC激动剂佛波醇显著增加地塞米松诱导成骨细胞的凋亡率;PKC抑制剂星型胞菌素显著减少地塞米松诱导成骨细胞的凋亡率。地塞米松可激活胞浆中的PKC向胞膜转移。PKC途径是调节地塞米松诱导成骨细胞凋亡的机制之一。
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