【摘 要】
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睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)是生精小管中唯一的体细胞,具有支持生精细胞发育,分泌多种细胞因子,调控精原干细胞分化,维持精子发生的顺利进行,分泌睾丸液等重要功能。抗缪勒氏管激素(Anti-Mullerian Hormone,AMH)是转化生长因子β超家族(Transforming Growth Factor-Beta,TGF-β)的一个二聚体糖蛋白,在睾丸中,AMH由支持细胞分泌。
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睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)是生精小管中唯一的体细胞,具有支持生精细胞发育,分泌多种细胞因子,调控精原干细胞分化,维持精子发生的顺利进行,分泌睾丸液等重要功能。抗缪勒氏管激素(Anti-Mullerian Hormone,AMH)是转化生长因子β超家族(Transforming Growth Factor-Beta,TGF-β)的一个二聚体糖蛋白,在睾丸中,AMH由支持细胞分泌。然而,关于牦牛AM H基因及其对牦牛睾丸支持细胞的影响仍未见报道。本研究旨在阐明牦牛AMH基因的特征及其在睾丸支持细胞中的调控作用。首先,本研究通过逆转录PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术对牦牛AM H基因进行了c DNA序列克隆,并对其进行了生物信息学分析;其次,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)技术进行了组织及不同发育时期睾丸中的表达分析;最后,通过脂质体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究了AMH基因在牦牛睾丸支持细胞中的作用。研究结果表明:1)牦牛AMH基因c DNA序列全长为2 017 bp(Gen Bank No.MN872668),开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为1 728 bp,5′UTR为211 bp,3′UTR为78 bp,编码氨基酸575个;同源性分析表明,牦牛AMH基因与黄牛的同源性最高;结构预测表明,牦牛AMH蛋白是一个脂溶性亲水蛋白,包含一个AMH＿N蛋白结构域和一个高度保守的TGF-β(AMH＿C)结构域。2)不同组织中的表达分析结果表明,AMH基因在牦牛各类组织中均有表达,其中在睾丸中的表达量最高(P<0.01),在卵巢和脾脏中的表达量最低(P<0.01)。3)不同发育阶段睾丸中的表达分析结果表明,AMH基因在不同发育阶段牦牛睾丸中均有表达,在睾丸中的表达量随着年龄的增长呈先上升后下降的趋势,且在幼年(1岁)时期睾丸中的表达量最高(P<0.01)。4)干扰AMH基因后,支持细胞的增殖率在48 h、60 h和72 h时间点显著低于阴性对照组(P<0.05),相较于对照组,实验组中增殖相关基因PCNA的表达极显著下调(P<0.01),促凋亡基因BAX和CASP3的表达极显著上调(P<0.01),抗凋亡基因BCL2的表达极显著下调(P<0.01),支持细胞发育相关基因ABP、SCF和AMHR2的表达极显著下调(P<0.01)。综上结果表明,AMH基因促进支持细胞增殖相关基因PCNA的表达,抑制支持细胞凋亡相关基因BAX和CASP3的表达,并调控支持细胞发育相关基因AMHR2、ABP和SCF的表达。本研究结果为进一步研究AMH基因在牦牛睾丸支持细胞中的调控机制提供了依据。
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