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目的:
通过动物实验分别建立髓核组织暴露于椎体内部环境的大鼠椎体骨折模型和髓核组织没有暴露于椎体内部环境的大鼠椎体骨折模型,通过对比两组椎体骨折模型中的骨折愈合情况、比较两组之间免疫反应阳性细胞的表达关系。初步对髓核组织暴露于椎体内部环境后脊柱骨折骨愈合特点及免疫性影响因素进行研究,初步探究影响椎体骨折愈合的因素。
方法:
实验动物:选择60只SPF级成年SD大鼠,雌雄不限。实验分组:采用随机数字法把大鼠分为2组,实验组和对照组(每组各30只)。实验干预:于大鼠用10%水合氯醛腹腔腹腔注射麻醉后,备皮及碘伏消毒,实验组大鼠经脊柱的前外侧入路,分别暴露L4、L5椎体。于L5椎体高度2/3处,侧前方开窗(1.5mm×1.5mm)后用1.0mm克氏针倾斜45度经L4/5间盘钻入L4椎体下终板,破坏L4/5髓核及椎间盘组织。让破坏后的髓核组织暴露于L5椎体的内部。对照组行伪手术,相同的手术入路,L5椎体相同位置开窗并以与实验组同样的克氏针以相同角度钻入椎体。但所用的克氏针在椎体内深度不超过L5椎体的上终板,不进入L4/5椎间隙,不破坏其髓核及椎间盘组织。分别于术后的第3天及术后第1、2、4、8周分批处死实验动物,分别取大鼠的L5椎体行骨组织切片及免疫组织化学染色。观察指标:①常规苏木精-伊红染色,观察比较两组大鼠骨折后的成骨特点、骨痂生长、骨小梁分化、骨结构的完整性及用自动图像分析仪行骨组织形态计量分析。②应用免疫组织化学技术,观察标本中CD4阳性反应细胞的表达。
结果:
光镜下可见实验组、对照组均失去正常骨结构,但术后实验组中骨纤维、骨小梁生长及整体骨愈合较对照组差,两组椎体骨折后的骨组织形态计量分析有统计学意义。免疫组化染色显示术后对照组标本中各时间段极少有CD4阳性反应细胞表达。实验组术后第2周、4周有较多CD4阳性反应细胞表达,比较同时间点的对照组标本中CD4阳性细胞的表达有统计学意义(p<0.05)。
结论:
①前外侧入路成功制作髓核组织暴露于椎体内部的大鼠椎体骨折模型,可以观察椎体内部环境改变对椎体骨折愈合的影响。②通过实验观察到有髓核组织暴露于椎体内的骨折较没有髓核组织暴露于椎体内的骨折愈合差。③髓核组织暴露于椎体内的骨折,其相应椎体的内部骨生长环境发生改变,于特定时间段发现其内部产生较多的CD4阳性反应细胞。髓核组织作为有免疫性的“隔离抗原”暴露于椎体,完成抗原暴露,有产生自身免疫反应的倾向。