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近年来马尾松、杉木、思茅松等主要针叶造林树种相继受到病虫害的影响损失严重，林木病虫害危及我国林业生产的发展。因此，开展针叶树种抗虫研究，具有非常重要的实践意义。利用常规的抗虫育种方法存在周期长、缺乏适宜的抗源等缺点，而传统的化学防治又有成本高、污染环境的不足。应用转基因育种可以克服以上缺陷，作为目的基因的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因(Bt基因)是一种广谱杀虫剂，对鳞翅目、鞘翅目等目的昆虫有良好的杀虫效果。本实验在改造后的Bt基因5’端加上35S启动子，3’端加上NOS终止序列，成功的构建了植物抗虫基因表达载体PBI-CryIA(b)。
虽然，通过转基因的方法，可以提高树木抗虫性，但由于针叶树种组培技术进展缓慢，且存在很难建立有效的再生体系，转化效率较低等问题，这些因素严重制约了针叶树种转基因技术的发展与应用。
本研究在成功的构建了植物抗虫基因表达载体PBI-CryIA(b)和已经建立了丽江云杉的有效体胚再生体系的基础上，以丽江云杉的胚性愈伤为外植体材料，进行了农杆菌介导的丽江云杉遗传转化体系的探索，为进一步以丽江云杉作为针叶树种的模式植物，进行马尾松、杉木及思茅松等主要针叶树种抗虫基因遗传转化研究奠定基础，并提供理论依据，本研究的主要内容和结果如下：
1植物抗虫基因表达载体(PBI-CryIA(b》的构建
(1)通过PCR技术，从PKUB质粒中克隆出抗虫基因CryIA(b)，并成功将该片段连接到PGEM-T载体中，测序结果显示，所克隆CryIA(b)基因全长1845bP，与原基因序列(改造后的基因)100％同源。
(2)将T载体(PGMT-CryIA(b》与表达载体PBI121酶切，然后胶回收酶切产物。
(3)通过DNA重组技术，将目的基因正向插入PB1121载体的CaMV35S启动子和NOS终止子之间，构建成植物表达载体PBI-CryIA(b)。
(4)通过冻融法将构建好的植物表达载体(PBI-CryIA(b))转入根癌农杆菌LB-4404中，PCR检测，准备用于丽江云杉胚性愈伤的遗传转化。
2丽江云杉遗传转化体系的优化
通过调整Kan、Carb、Cef的浓度，设置不同的浸染时间、共培养时间，分析了不同的培养条件对转化效率的影响，初步优化农杆菌介导的丽江云杉遗传转化体系，最终得到最佳转化条件。
(1)丽江云杉胚性愈伤组织对Kan的敏感性试验结果显示，卡那霉素的最低选择压为25mg/L；
(2)丽江云杉胚性愈伤组织抗菌素试验结果显示，使用400mg/L的Carb和Cef均可有效的抑制农杆菌的生长，Carb比Cef更能催进愈伤的生长，Carb的最佳脱菌浓度为400 mg/L；
(3)丽江云杉胚性愈伤组织的共培养试验结果显示，最佳共培养时间为2天：
(4)丽江云杉胚性愈伤组织的浸染试验结果显示，最佳浸染时间为5-10分钟，最佳浸染浓度为OD600=0.5-0.7；
(5) AS对转化影响试验结果表明，添加AS(50mg/L)可以显著提高愈伤组织转化率。
综上所述，本研究成功的构建了植物抗虫基因表达载体(PBI-CryIA(b))，并以此为基础对丽江云杉遗传转化体系进行了优化。