目的:为了探讨PR39对急性缺血心肌的保护作用,本研究构建腺相关病毒（AAV）介导的融和基因NT4-TAT-His-PR39,验证其在人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞株）表达;在缺氧ECV304细胞内HIF-1α表达及抗缺氧应激凋亡作用及其对缺氧环境鸡胚促血管生成作用。方法:1.应用PCR技术和T载体克隆法克隆PR39基因,酶切鉴定,并进行DNA测序及分析。2.将编码PR39、穿膜肽TAT、6×His标签肽及NT4信号肽的四个基因片段用DNA连接酶相连,构建pBV220/NT4-TAT-His-PR39融合基因载体,酶切获取NT4-TAT-His-PR39融合基因片段,将其装入质粒pSSHG/NT4-TAT-His-PR39。3.采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染293细胞,获得重组携带NT4-TAT-His-PR39的AAV载体,斑点杂交方法测定重组病毒滴度。4.AAV-PR39和空病毒载体（EV）分别感染ECV304,免疫细胞化学检测6×His表达情况,以此验证融合基因的表达。5.将ECV304分为AAV-PR39组和PBS组,在1%O2条件培养,免疫细胞化学测定ECV304中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）表达。6.流式细胞仪检测（FCM）分析低氧环境下ECV304细胞凋亡情况。7.30只鸡胚随机分为AAV-PR39组、EV组和PBS组,将各组细胞分别在低氧（5%O₂）和常氧（21%O₂）条件培养,图象软件Image Pro Plus （IPP）分析鸡胚尿膜囊（CAM）血管密度。结果: 1 . PR39基因经DNA测序与Genebank序列一致。2.NT4-TAT-His-PR39融合基因经琼脂糖凝胶电泳鉴定正确,测序结果与实验设计的序列完全一致。3.经酶切鉴定将融合基因成功插入至pSSHG载体中;斑点杂交测定病毒的滴度为3.4×10⁹ PFU/ml。4.免疫细胞化学检测到实验组ECV304中6×His表达。5.免疫细胞化学检测到缺氧ECV304细胞内HIF-1α蛋白表达高于PBS组（t=11.23, P<0.001）。6.流式细胞仪分析低氧环境下ECV304细胞周期图,实验组ECV304中凋亡率明显小于PBS组。7.低氧环境下,实验组的鸡胚尿膜囊血管密度明显大于PBS组及EV组。在常氧环境下,三组之间血管密度并无明显差别。结论:1.成功克隆PR39基因。2.成功构建具有穿膜功能的“NT4-TAT-His-PR39”融合基因。3.成功构建pSSHG/ NT4-TAT-His-PR39重组腺相关病毒载体,并成功包装较高浓度的重组病毒。4.重组携带NT4-TAT-His-PR39的AAV载体能在ECV304中进行分泌表达,并提高缺氧ECV304中HIF-1α蛋白的表达水平。5.PR39具有抗缺氧应激细胞凋亡作用。6.重组AAV-PR39载体对缺氧鸡胚血管生成具有显著的促进作用。