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超大孔连续床层析分离技术是一种新型的生物层析分离方法,床层介质内有尺寸达数微米至数百微米且相互连通的超大孔隙,在生物分离纯化方面有广阔应用前景。溶剂冷冻结晶过程是制备超大孔连续床晶胶基质的关键。实验考察了基质反应液体系的液—固相变特性,通过测量基质反应液的冷冻曲线,分析得到了不同浓度反应液在不同冷冻条件下的冰点温度(Tmc)与起始结晶温度(Tc)。结果表明,反应液在冷冻过程中有过冷现象,当冷冻速率足够低时,冷冻速率对Tmc的影响较小;反应液浓度为1~10%时,Tc在一定温度范围内随机分布,而Tmc随反应液浓度的增大而降低,与反应液浓度成线性关系。在变温冷冻条件下制备了聚丙烯酰胺基超大孔连续床晶胶基质。基质的形成过程是溶剂结晶相变与单体聚合反应的耦合过程。研究表明,晶胶基质的孔隙结构、轴向扩散系数、渗透率、孔隙率等性能受冷冻温度、冷冻速率和催化剂用量的影响。通过改变冷冻条件控制溶剂结晶相变和改变催化剂用量控制聚合反应速度,制备得到不同性能的晶胶基质。制备了Cu2+-IDA、Zn2+-IDA和Ni2+-IDA型金属螯合亲和超大孔连续床晶胶介质,并考察了床柱内牛血清蛋白(BSA)的吸附层析特性。结果表明,金属螯合亲和晶胶介质在不同缓冲液pH值与盐度下对BSA的吸附量各不同,Cu2+-IDA柱在pH 5.0时,对BSA的吸附量最大,为3.29 g BSA/L晶胶,盐的存在(pH 7.2)对BSA吸附影响不大;Zn2+-IDA和Ni2+-IDA柱对BSA的吸附在pH 4.6时吸附量最大,分别为4.45和3.92 g BSA/L晶胶,盐的存在对BSA的吸附有较大影响。在实验所考察的上样流速(1~6cm/min)范围内,流速对BSA的穿透曲线和吸附容量影响不大;以0.2M的咪唑溶液可以实现洗脱,较慢的流速有利于BSA的洗脱。在此基础上,通过变温冷冻结晶致孔法得到了内嵌Fe3O4纳米粒的超大孔连续床晶胶介质。晶胶介质孔径在10~50μm之间,轴向扩散系数小。对BSA的吸附层析实验表明,内嵌上Fe3O4纳米粒后,对BSA的吸附量达1.93 g BSA/L晶胶。