蛋白质光谱探针是20世纪50年代发展起来的测定蛋白质的分析方法。借助于蛋白质光谱探针可以测定微量的蛋白质，并可以研究蛋白质结构与功能的关系，研究蛋白质与小分子配体的作用机理。它的主要特点是：操作方法较为简便；灵敏度高；线性范围宽；干扰物质少；应用范围广等，具有广阔的发展前景。基于蛋白质定量分析的研究现状及本实验室的研究基础，本文做了以下几个方面的工作： 1.概述了蛋白质化学基础，综述了蛋白质定量分析的一些主要方法及其在生物化学、药学、食品和临床医学等方面的应用，引用文献126篇。 2.寻找新的性能优良的光谱探针 (1)染料探针：研究发现，变色酸2C在pH3.82的Britton-Robinson(B-R)缓冲介质中，能与血清蛋白质形成有色复合物，λmax为560nm，比试剂本身红移约51nm，表观摩尔吸光系数为3.05×105L/mol·cm(BSA)，线性范围为20～80mg/L；偶氮胂羧在pH1.5的Clark-Lubs(C-L)缓冲介质中，能与多种蛋白质在室温下能迅速结合生成蓝色复合物，λmax为612nm。线性范围(HSA)为0～100mg/L，表观摩尔吸光系数为2.67×105L/mol·cm。而且这两种方法简单，稳定，线性范围宽，对比度大，灵敏度高，能应用于人血清中总蛋白质的测定，因此，建立了以变色酸2C和偶氮胂羧为光谱探针光度法测定人血清蛋白质的新方法。 (2)金属络合物光谱探针：研究表明，在pH2.0～2.4的酸性介质中，Cu(Ⅱ)-AAⅢ络合物与蛋白质发生作用，生成三元分子复合物。线性范围为0～120mg/L，表观摩尔吸光系数ε635=3.89×105L·mol-1·cm-1；在pH1.8～2.2的酸性介质中，铜(Ⅱ)-硝基磺酚S络合物与蛋白质发生作用，导致络合物溶液褪色，线性范围为0～80mg/L，表观摩尔吸光系数ε617=4.81×105L·mol-1·cm-1；在pH3.80～4.20的Clark-Lubs缓冲介质中，Cu(Ⅱ)-ARS络合物与蛋白质作用，其吸收光谱发生大幅度变化，生成的深红色三元复合物，λmax为538m，比试剂本身红移118nm，比络合物λmax红移30nm。线性范围为0～300mg/L，表观摩尔吸光系数ε538=2.37×105L·mol-1·cm-1(人血清白蛋白)。这些方法的灵敏度较大数直接以染料为光谱探针的光度法高，且生物体内常见无机离子及有机物质基本不干扰测定，直接应用于人血清中蛋白质总量的测定，结果满意，因此建立了以络合物为光谱探针分光光度法测定蛋白质含量的新方法。 3.深入开展蛋白质与染料探针(小分子有机配体)相互作用理论研究 研究了铀试剂Ⅲ与人血清白蛋白反应前后的吸收光谱，并对其反应机理和结合平衡进行了深入探讨。深入开展蛋白质与染料探针(小分子有机配体)相互作用的理论研究不仅对于改进蛋白质分析方法有实际意义，而且有助于阐明生物大分子与小分子配体相互作用的化学本质。因而在生命科学中有重要意义。