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背景和目的:糖尿病肾病是临床上糖尿病最常见的并发症,具有进展快、治疗难度大的特点,且近年来患病率逐步攀升。蛋白尿是糖尿病肾病的主要临床表现,从早期微量白蛋白尿到中晚期大量蛋白尿,目前已经证实蛋白尿是影响糖尿病肾病进展的独立危险因素,因此探求蛋白尿的发病机制及寻找降低蛋白尿保护肾功能的方法显得尤为迫切。以往研究者对糖尿病肾病病理的研究主要集中在肾小球肥大、基底膜增厚、系膜区细胞增生及基质增多、小球硬化等方面,然而这些病理改变仅能解释部分临床表现,更多的病因仍不明确,近些年,人们将研究方向转向了肾小球足细胞上面,因为足细胞是肾脏滤过屏障的最后一层,不仅与机械屏障相关更涉及到电荷屏障,所以一时成为热点[1]。足细胞在维持肾小球滤过及阻止蛋白尿漏出方面起着至关重要的作用[2-3]。任何形式的损伤无论是自身免疫反应还是药物毒性作用均可导致足细胞受损,进而影响其功能。足细胞损伤主要表现为细胞肥大、足突消失、数量减少甚至脱落凋亡。相邻足突之间有着类似于拉链状结构的一层隔膜,隔膜是由多种分子相互结合而成的复合体,裂孔隔膜是滤过膜的最后一层,如果其完整性遭到破坏将会导致蛋白尿的漏出,体内高血糖、AGEs、氧化应激作用均会引起足细胞的损伤裂孔隔膜受损。有实验表明在糖肾鼠模型中初期足细胞的数量就有所减少,隔膜上的分子Nephrin、Podocin蛋白含量也会下降,到后期这种变化更加明显。足细胞损伤与肾小球硬化亦有关系[4]。Donblier等[5]在糖肾患者病理中观察到在早期Nephrin的表达就可出现异常,并且与蛋白尿的发生和肾小球滤过有明显相关性,因此研究足细胞损伤与糖尿病肾病的关系,为临床上防治糖尿病肾病提供新的依据。吾师姚源璋教授从事临床诊疗工作近四十年,擅长肾脏病的防治尤其对糖尿病肾病有其独特见解。在结合多年临床经验及糖尿病肾病发病特点的基础上创制出了糖肾合剂,该方切合糖肾病机,兼顾标本虚实,本以气阴两虚为主,标实以血瘀、痰湿、浊毒为甚,所以该方具有益气生津、通络活血之功,在临床上取得了满意疗效。前期实验中我们证实了该方具有调节JAK/STAT通路[6]、调节肾组织SOCS—1、TGF—β 1及VEGF[7]的表达来保护肾脏的作用。糖肾合剂方降低蛋白尿的作用机制是否跟调节足细胞分子nephrin和podocin的表达有关呢?该实验通过动物模型的方式将分为模型组、治疗组、对照组合正常组,最后通过测定各组肾组织中nephrin和podocin的含量,来分析糖肾合剂方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,及其可能机制。研究方法:糖尿病大鼠模型的建立:给予SD大鼠高糖高脂饲料5周后腹腔注射小剂量链尿佐菌素(35mg/kg);成模标准:大鼠非空腹血糖>16.7mmol/L。1.分组:将大鼠分为正常组,成模后再分为模型组、对照组及糖肾合剂高、低组共5组。2.给药方法:按照15ml/Kg/d的剂量以灌胃的方式分别给予各组相应的药液。给药干预共8周。3.疗效评价方法:给药8周期后,在处死大鼠前以尾部采血的方式测定每只大鼠血糖、称重、收集并测定大鼠24小时尿蛋白定量;麻醉大鼠后用一次性采血针腹主动脉采血并检测相关生化指标(血肌酐、血清白蛋白、尿素氮);对大鼠肾组织做病理切片并HE染色观察肾组织结构病变;采用免疫印迹(Western blotting)法和聚合酶链反应(PCR)方法检测糖尿病大鼠肾组织中nephrin、podocin蛋白的表达和nephrinmRNA、podocinmRNA的含量并应用图像分析软件(Image—Pro Plus)进行半定量分析,SPSS17.0对数据进行分析处理,P<0.05为有统计学意义,P<0.01为有显著统计学意义。结果:1.24h尿蛋白定量:模型组蛋白定量明显高于正常组,糖肾高、低组及氯沙坦对照组蛋白定量低于模型组且有统计学意义;2.肾功能:模型组肌酐、尿素氮水平明显高于正常组,糖肾高、低组及氯沙坦对照组肌酐、尿素氮水平低于模型组且有统计学意义;3.血清白蛋白:模型组血清蛋白明显低于正常组,糖肾高、低组及氯沙坦对照组血清蛋白高于模型组且有统计学意义;4.模型组肾组织中nephrin、podocin蛋白含量与正常组相比明显减少(p<0.01),糖肾高、低剂量组及药物对照组与模型组相比肾组织中nephrin、podocin表达含量增加(P<0.01),与正常组比较nephrin、podocin表达含量减少(p<0.01)。5.病理变化:光镜下可见正常组肾小球形态规整清晰可见,无明显细胞增生,系膜区无明显增宽,毛细血管襻无压迫,无球囊粘连,小管间质未见纤维化。模型组光镜下可见肾小球肥大,系膜区明显增宽、基底膜增厚,部分球囊粘连及纤维化,偶见间质炎症细胞浸润。糖肾高低组及氯沙坦组镜下改变较模型组减轻,其中糖肾高组和氯沙坦对照组肾脏病理改变最为明显。结论:糖肾合剂可降低模型鼠尿蛋白定量、升高血清蛋白含量、对肌酐尿素氮有不同程度的降低并可减轻肾脏组织病理变化。糖肾合剂对肾脏的保护作用机制可能与上调肾组织局部nephrin、podocinmRNA及蛋白的表达有关。