经筋辨证针刺结合关节松动术对膝骨关节炎兔Notch1、Hes5、IL-1β影响的机制研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jp19861213
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目的:本实验以Notch信号通路为切入点,通过观察26只大耳白兔的Notch1表达含量,Hes5含量和IL-1β含量探究经筋辨证针刺结合关节松动术治疗膝骨关节炎兔的临床疗效,同时阐明经筋辨证针刺结合关节松动术在KOA治疗中的作用机制,为临床治疗KOA提供研究方向和思路。材料与方法:将健康普通级大耳白兔共26只(雌雄各半)随机选取6只作为空白组,剩余20只进行改良Hulth造模。采用单笼单只饲养,实验者进行实验期间应每天认真观察和记录各组大耳白兔的基本情况,即毛色、饮食、活动规律以及二便情况等。本实验采取改良Hulth造模方法,在改良Hulth法造模后对大耳白兔进行连续1周腹腔注射青霉素以防感染,同时每天驱赶大耳白兔活动30 min并持续3周,3周后再随机选取2只处死来检验造模是否成功,通过观察比较关节软骨的光镜下的病理形态变化、大体观察结果和行为学检查结果来检验造模是否成功。最后将剩下的18只大耳白兔根据随机数字表法随机分为模型组、氨基葡萄糖组、经筋+关节松动术组共3组,每组6只。给予空白对照组与模型组大耳白兔以正常饲养6周;氨基葡萄糖组采取连续6周灌胃盐酸氨基葡萄糖20mg/(kg·d);经筋+关节松动术组先选取足三阳、足三阴经筋点2~3个进行针刺;针刺后行关节松动术,以MatilandⅢ级手法为主,即在膝关节活动的极限范围内,大范围、有节律地来回进行关节松动,以每次均能感受到膝关节周围软组织紧张为止。重点是对胫腓关节进行前后向和后前向滑动、对髌股关节水平摆动、对胫股关节屈伸或旋转及膝关节的分离牵引的关节松动术;1次针刺和关节松动术各行15min,每日1次,连续6周。治疗结束后,采用荧光定量PCR法及Western Blot法检测治疗后膝关节软骨中Notch1表达含量以及Hes5含量,采用ELISA法检测大耳白兔血清中的IL-1β含量;镜下采用HE染色观察各组兔的左膝软骨病理形态变化;与此同时观察大耳白兔左膝关节大体结构变化和生理变化,接着用量角器测量大耳白兔膝关节活动度变化。得出的实验数据采用SPSS26.0分析,结果采用((?)±s)表示,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1.膝关节活动度变化:治疗结束后,相比于空白组,其余三组大耳白兔的膝关节活动度均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);相比于模型组,氨基葡萄糖组和经筋+关节松动术组大耳白兔膝关节活动度均高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);同时经筋+关节松动组的大耳白兔膝关节活动度略高于氨基葡萄糖组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.大体观察:空白组关节软骨呈肉白色,关节无积液,无骨赘增生,表面光滑、无裂纹及增生,外观与正常软骨无异;模型组关节软骨呈暗灰色且软骨表面磨损相当严重甚至有裂纹,以及边缘有少量骨赘增生,质地呈模糊状;氨基葡萄糖组关节软骨呈轻微灰色,软骨表面无明显缺损,质地较硬,无积液渗出,关节软骨轻微肿胀;经筋+关节松动术组软骨表面呈灰白色,基本无积液渗出,软骨表面无明显缺损,质地较硬,肿胀程度较轻。3.荧光定量PCR法检测结果:治疗结束后,相比于空白组,其余三组的Notch1m RNA和Hes5m RNA表达量均升高,差异具有统计学意义(P<0.01);相比于模型组,氨基葡萄糖组和经筋+关节松动术组Notch1m RNA和Hes5m RNA表达量均低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);同时经筋+关节松动组的Notch1m RNA和Hes5m RNA表达量略低于氨基葡萄糖组(P<0.05)。4.Western Blot检测结果:治疗结束后,相比于空白组,其余三组的Notch1蛋白质和Hes5蛋白质表达量均升高,差异具有统计学意义(P<0.01);相比于模型组,氨基葡萄糖组和经筋+关节松动术组的Notch1蛋白质和Hes5蛋白质表达量均低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);同时经筋+关节松动组的Notch1蛋白质和Hes5蛋白质表达量略低于氨基葡萄糖组(P<0.05)。5.ELISA检测结果:治疗结束后,相比于空白组,其余三组的IL-1β含量均升高,差异具有统计学意义(P<0.01);相比于模型组,氨基葡萄糖组和经筋+关节松动术组的IL-1β含量均低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);同时经筋+关节松动组的IL-1β含量略低于氨基葡萄糖组(P<0.05)。结论:1.Notch信号通路与KOA息息相关,抑制Notch信号通路的过度激活可以有效抑制KOA的病理进程。2.经筋辨证针刺结合关节松动术可以明显降低KOA模型中的Notch1,Hes5和IL-1β的表达水平,从而抑制Notch信号通路的过度激活同时减轻膝关节的炎症反应和软骨凋亡,进而改善KOA症状。3.经筋辨证针刺结合关节松动术可以有效保护膝关节软骨,改善KOA症状,并防止KOA样变区域扩大。4.经筋辨证针刺结合关节松动术治疗KOA的疗效要略优于盐酸氨基葡萄糖法。
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