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目的高尿酸血症是当今中老年常见病,病因多样病机复杂且起病隐匿,临床症状不典型,可导致各类心血管疾病和慢性肾脏病的发生,近年来发病有年轻化趋势。目前高尿酸血症的病因学说繁杂,现代医学治疗多为对症治疗,降低尿酸,消除临床表现为主。但西医用药副作用大,不容忽视。传统中医学理论认为,治病必求其本,通过整体调节机体气血的运行,阴阳的平衡,增强自身御邪功能,注重高尿酸血症本虚标实的病机特点,清利湿热浊毒,从而达到治疗的目的,其疗效和优势也日益得到国内外多学者的肯定。本课题在中医学理论指导下结合中医临床医师多年的经验方总结创制而成利湿活血方,功善清热利湿,活血通络,化瘀散结,用于治疗湿热蕴结、浊瘀互阻型高尿酸血症。在降低高尿酸血症模型动物血清尿酸的基础上,以尿酸对血管内皮功能的直接损伤进而引发机体广泛损害为切入点展开研究,包括文献的整理和实验研究,通过研究利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的人脐静脉血管内皮细胞相关炎症因子血管舒缩因子等的影响,进而探讨利湿活血方治疗高尿酸血症、保护血管内皮功能的药效机理,揭示其立法组方优势,为临床用药提供安全、合理、有效依据。方法本实验研究利湿活血方含药血清对经高尿酸处理的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的影响,研究高浓度尿酸对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响,验证高尿酸血症细胞模型,在此基础上设立空白对照组、模型组、苯溴马隆组、四妙丸组、利湿活血方低、中、高剂量组以及拆方1组、拆方2组共9组,分别从细胞活性、细胞凋亡、细胞黏附因子、细胞舒缩因子和基于P38-NF-κB-MCP-1路径的相关炎症因子并采用CCK-8、AnnxinFITC/PI、ELISA、硝酸还原酶法、RT-PCR和WB等方法分别对相应指标进行检测。结果1.利湿活血方及其拆方对HUVEC活性及凋亡的影响1.1不同尿酸浓度对HUVEC活性的影响1.1.1不同尿酸浓度作用于HUVEC细胞24小时后,与空白对照组相比,当尿酸浓度大于等于20mg/dl时OD值明显下降,差异有显著性（P<0.01）。1.1.2不同尿酸浓度作用于HUVEC细胞48小时后,与空白对照组相比当尿酸浓度大于15mg/dl时OD值明显下降,差异有显著性（P<0.05,P<0.01）。1.1.3不同尿酸浓度作用于HUVEC细胞72小时后,与空白对照组相比当尿酸浓度大于等于15mg/dl时OD值显著下降,差异有显著性（P<0.01）。1.2利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC活性的影响1.2.1当含药血清浓度为5%时,与空白对照组相比,两组高尿酸浓度模型组细胞活性均受到明显抑制（P<0.05）;与20UA模型组相比,利湿活血方中高剂量组细胞活性上调,差异有显著性（P<0.05）;与40UA模型组相比,阳性药苯溴马隆和利湿活血方中高剂量组细胞活性上调,差异有显著性（P<0.05,P<0.01）。1.2.2当含药血清浓度为10%时,与空白对照组相比,两组高尿酸浓度模型组细胞活性均受到明显抑制（P<0.05,P<0.01）;与20UA模型组相比,利湿活血方中高剂量组细胞活性上调,差异有显著性（P<0.05,P<0.01）;与40UA模型组相比,利湿活血方中高剂量组细胞活性上调,差异有显著性（P<0.05）。1.2.3当含药血清浓度为20%时,与空白对照组相比,两组高尿酸浓度模型组细胞活性均受到明显抑制（P<0.05）;与20UA模型组相比,阳性药苯溴马隆组合利湿活血方低、中、高剂量组细胞活性上调,差异有显著性（P<0.05）;与40UA模型组相比,阳性药苯溴马隆和利湿活血方中高剂量组细胞活性上调,差异有显著性（P<0.05）。1.2.4经高尿酸处理24h后,与空白对照组相比,模型组细胞活性明显受到抑制（P<0.05）;与模型组相比,苯溴马隆组,四妙丸组,利湿活血方中、高剂量组以及拆方2组细胞活性明显上调（P<0.05,P<0.01）。1.2.5经高尿酸处理48h,与空白对照组相比,模型组细胞活性明显受到抑制（P<0.05）;与模型组相比,苯溴马隆组和利湿活血方中剂量组细胞活性明显上调（P<0.05,P<0.01）。1.2.6对经高尿酸处理72h后,与空白对照组相比,模型组细胞活性明显受到抑制（P<0.05）;与模型组相比,苯溴马隆组,利湿活血方低、中、高剂量组细胞活性明显上调（P<0.05,P<0.01）。1.3利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC凋亡的影响1.3.1经高尿酸处理24h后,与空白对照组相比模型组细胞凋亡率显著上升（P<0.001）;与模型组相比,苯溴马隆组、利湿活血方中高剂量组和拆方2组细胞凋亡率明显下调（P<0.001,P<0.01,P<0.05）,四妙丸组和拆方1组有下降趋势但无统计学意义（P>0.05）,利湿活血方两个剂量组相比,中剂量效果优于高剂量;与利湿活血方中剂量组相比,四妙丸组有差异（P<0.05）。1.3.2经高尿酸处理48h后,与空白对照组相比,模型组细胞凋亡率显著上升（P<0.001）;与模型组相比,各给药组的细胞凋亡率明显下调（P<0.001,P<0.01,P<0.05）;与利湿活血方中剂量组相比,高剂量组在降低细胞凋亡率上效果更为明显。2.利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC黏附因子的影响2.1利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC分泌sICAM-1的影响与空白组相比,经高尿酸处理后,模型组人脐静脉血管内皮细胞上清液中sICAM-1含量明显上升,差异有显著性（P<0.001）;与模型组相比,各给药组细胞上清液中sICAM-1含量显著降低,差异有显著性（P<0.001）,其中阳性药降低效果最为明显,利湿活血方高剂量组降低趋势较中剂量组明显,两个拆方组降低趋势均明显于拆方组;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组以及拆方2组差异有显著性（P<0.001）。2.2利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC ICAM-1mRNA和VCAM-1mRNA表达的影响2.2.1对ICAM-1mRNA含量的影响:与空白对照组相比,模型组ICAM-1mRNA含量明显上升,差异有显著性（P<0.001）;与模型组相比,各给药组ICAM-1mRNA含量均显著下降（P<0.001）,其中利湿活血方中剂量组下降最为明显,全方两个剂量组均优于其他给药组,拆方1较拆方2为好;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组,四妙丸组以及拆方1、2组有差异（P<0.001,P<0.05）。2.2.2对VCAM-1mRNA含量的影响:与空白对照组相比,模型组VCAM-1mRNA含量明显上升,差异有显著性（P<0.001）;与模型组相比,各给药组VCAM-1mRNA含量均显著下降（P<0.001）,其中利湿活血方高剂量组下降最为明显,全方两个剂量组降低VCAM-1mRNA表达均优于其他给药组,拆方2较拆方1为好;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组,四妙丸组以及拆方1、2组有差异（P<0.001,P<0.05）。2.3利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC ICAM-1和VCAM-1蛋白表达的影响经高尿酸处理后,与对照组相比,模型组ICAM-1和VCAM-1蛋白表达均出现上调趋势;与模型组相比,各给药组ICAM-1和VCAM-1蛋白表达均有不同程度的下调,在ICAM-1蛋白方面四妙丸组,利湿活血方中剂量组以及拆方2组下调最为明显,在VCAM-1蛋白方面利湿活血方中、高剂量组下调最为明显。3.利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理HUVEC NO、eNOSmRNA、ET-1mRNA表达的影响3.1利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC分泌NO含量的影响与空白对照组相比,模型组NO含量明显下降（P<0.05）;与模型组相比,各给药组NO含量均有不同程度的增加,其中苯溴马隆组有上升趋势但无统计学意义（P>0.05）,余各给药物差异有显著性（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,其中利湿活血方高剂量组上调最为明显;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组和拆方2组差异有显著性（P<0.01,P<0.001）。3.2利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVEC eNOS mRNA和ET-1mRNA的影响3.2.1对eNOSmRNA表达的影响:经高尿酸处理后,与空白对照组相比,模型组eNOSmRNA含量明显降低,差异有显著性（P<0.05）;与模型组相比各个药物组eNOSmRNA含量均有不同程度的上升,除四妙丸组以外,余给药物差异均有显著性（P<0.001）,利湿活血方全方两个剂量组差异不明显;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组及拆方1、2组差异有显著性（P<0.001）。3.2.2对ET-lmRNA表达的影响:经高尿酸处理后,与空白对照组相比,模型组ET-1mRNA含量明显升高,差异有显著性（P<0.001）;与模型组相比,各个药物组ET-1mRNA含量均有不同程度的降低,差异均有显著性（P<0.001）,其中利湿活血方高剂量组降低趋势最为明显;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组及拆方1、2组差异有显著性（P<0.001）。4.利湿活血方及其拆方对经高尿酸处理的HUVECP38、NF-κB、COX-2、MCP-1基因表达的影响4.1对P38MAPKmRNA表达的影响:与空白对照组相比,模型组P38MAPK mRNA含量显著上调（P<0.001）;与模型组相比,各给药组P38MAPKmRNA含量明显下调（P<0.001）,其中利湿活血方全方两个剂量组降低趋势最为明显,拆方1组在降低P38MAPKmRNA含量方面作用优于拆方2组;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组和拆方2组差异有显著性（P<0.001,P<0.05）。4.2对NF-κBmRNA表达的影响:与空白对照组相比,模型组NF-κBmRNA含量显著上升,差异有统计学意义（P<0.001）;与模型组相比,各给药组NF-κBmRNA含量明显下降（P<0.001）,其中利湿活血方全方两个剂量组降低趋势最为明显,拆方1组在降低NF-κBmRNA含量方面作用优于拆方2组;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组和拆方1、2组差异有显著性（P<0.001,P<0.05）。4.3对MCP-1mRNA含量的影响:与空白组相比,模型组MCP-1mRNA含量显著上调（P<0.001）;与模型组相比,苯溴马隆组降低MCP-1mRNA含量明显,差异有统计学意义（P<0.01）,余各给药组MCP-1mRNA含量显著下调（P<0.001）,其中利湿活血方全方两个剂量组降低趋势最为明显,拆方1组在降低MCP-1mRNA含量方面作用优于拆方2组;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组和拆方1、2组差异有显著性（P<0.001）。4.4对COX-2mRNA含量的影响:与空白组相比,模型组COX-2mRNA含量显著上调（P<0.001）;与模型组相比,各给药组COX-2mRNA含量明显下调（P<0.001）,其中利湿活血方全方两个剂量组降低趋势最为明显,拆方1组在降低COX-2mRNA含量方面作用优于拆方2组;与利湿活血方高剂量组相比,苯溴马隆组、四妙丸组和拆方1、2组差异有显著性（P<0.001）。结论综上所述,本课题通过文献复习与实验研究,结合利湿活血方的中医功能主治,进行了相关现代药理实验研究,揭示了以清热利湿、活血化瘀法创制的中药利湿活血方治疗高尿酸血症的有效性和优势所在,探讨了以清热利湿消除病因为主的拆方1和以活血化瘀保护机体为主的拆方2在治疗中所发挥的作用及其对整体治疗效果的贡献,阐明其保护高尿酸血症细胞模型血管内皮的机制,为提升中医药治疗高尿酸血症的理论水平和临床疗效提供实验依据。