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[目的]原发免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是一种由体液免疫和细胞免疫异常导致血小板破坏增多而生成减少的自身免疫性出血性疾病,约占出血性疾病总数的1/3。增殖诱导配体(APRIL)是肿瘤坏死因子超家族中的新成员,与B细胞活化因子BAFF在结构和功能上十分相似。APRIL作为可溶性因子被各种细胞分泌,如非活化性B细胞、T细胞、单核细胞、树突状细胞、巨核细胞和巨噬细胞等。APRIL不仅在正常的免疫应答中起作用,在建立和维持自身免疫性和炎性疾病中也有重要的作用,尤其是在B细胞的增殖中起调控作用,介导免疫球蛋白类别的转换,并影响T细胞的应答。既往报道,通过实时定量PCR检测发现,与正常对照相比较ITP患者的外周单个核细胞中APRIL的mRNA水平明显上调,并且ITP患者血浆中可溶性APRIL的含量对比正常对照也是明显增高的。也有许多研究报道,在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮及原发性系统性硬化症等自身免疫系统疾病中,APRIL的表达水平也是明显升高的,并且其靶向药物贝利木单抗和阿塞西普已经应用于类风湿性关节炎的治疗中。基于APRIL具有促进增殖和调节免疫功能的作用,我们猜测,APRIL可能也参与了ITP自身免疫紊乱的发生与发展。本研究将明确血小板表面是否表达APRIL以及APRIL的表达量是否存在异常,进一步深入阐明APRIL是否以及如何介导血小板对ITP自身免疫发挥反向调控作用,并为发展新的治疗干预措施提供理论基础。[方法](1)本研究组入组诊断明确的ITP患者50人,另入组同期选取健康对照(HC相比)25例(年龄、性别匹配),采集外周静脉血,分离出血浆和外周血单个核细胞(PBMC)。(2)将血浆通过高速离心法分离,收获血小板。(3)流式细胞术检测ITP患者和正常对照的血小板表面膜表面结合型APRIL的表达水平。(4)分析ITP患者血小板表面膜表面结合型APRIL的水平与患者临床指标(血小板计数、血小板自身抗体、疗效等)之间的关系。(5)流式细胞术检测ITP患者外周单个核细胞中CD19+CD24hi CD38hi Bregs细胞亚群的含量,并与健康对照组比较分析。(6)通过ELISA检测ITP患者和正常对照的血浆中可溶性APRIL的含量水平。(7)给予APRIL体外刺激ITP组和HC组外周血单个核细胞,流式细胞术检测B10细胞含量变化。同时观察加用APRIL阻断剂后B10细胞含量的变化。(8)分别给予APRIL体外刺激和BLys体外刺激ITP组和HC组外周血单个核细胞细胞,流式细胞术检测加入不同刺激因子后对B10细胞含量产生的变化。[结果](1)经流式细胞术检测结果显示,初诊和慢性ITP患者血小板表面APRIL的表达量明显低于健康对照组MFI(1120.0400±241.4837)(p<0.001),此外,初诊ITP患者组较慢性ITP患者组更低MFI(626.1200±93.6978 VS 806.8400± 198.9369,p=0.001),差异具有统计学意义。并且,血小板计数与APRIL荧光强度呈正相关(r=0.396;p=0.015),差异具有统计学意义。ITP患者血小板计数越高,其表面APRIL的荧光强度越高。(2)特异性抗血小板膜蛋白抗体阳性组血小板表面APRIL的荧光强度高于特异性抗血小板膜蛋白抗体阴性组MFI(958.7143±221.4511 VS 693.9091±128.3156)(p=0.05),差异具有统计学意义。10例治疗完全缓解组ITP患者治疗后较治疗前血小板表面APRIL的荧光强度明显增强 MFI(721.3000±134.0481 VS 599.6000±70.32338,p=0.02),差异具有统计学意义。然而,在8例治疗无效组的ITP患者中,治疗前后血小板表面APRIL的荧光强度没有明显的变化(872.6667±225.53935 VS 846.0000±204.91624,p=0.81)。(3)ITP患者初治组和慢性组血浆中可溶性APRIL水平明显高于正常对照组(6.8770±2.9066pg/ml)(p=0.04 VS p=0.06)。ITP患者初治组和慢性组血浆中可溶性APRIL水平没有明显差异(10.4665±5.2198pg/ml VS 10.6993±5.0411pg/ml,p=0.856)。我们之后分析了血浆可溶性APRIL水平与患者临床指标的相关性,我们发现血浆可溶性APRIL的含量与血小板数目呈负相关(r=-0.3443,p=0.029)。(4)与正常对照相比,ITP患者Bregs含量明显降低,差异具有统计学意义。Bregs的含量与血小板计数呈正相关,差异具有统计学意义(5)加入APRIL因子刺激组的B10细胞的含量明显高于加APRIL因子+inh-APRIL 刺激组和对照组(12.1250±5.4494%VS 3.7370±3.475%VS 3.4860±3.1804%)(p<0.001),差异具有统计学意义。APRIL因子刺激产生了更多的B10细胞,而加入APRIL抑制剂后这种现象明显被抑制。APRIL因子组和B淋巴细胞刺激因子组的B10细胞含量都增高,而加APRIL因子组的B10细胞含量明显高于B淋巴细胞刺激因子组和对照组(p=0.001 VS p<0.001),差异具有统计学意义。[结论]1.APRIL的异常表达参与了 ITP免疫紊乱的发生与发展。2.可以通过监测ITP患者血小板表面APRIL的含量来预估患者的治疗效果。3.在ITP中APRIL抑制而不是促进免疫介导的炎性疾病。4.APRIL的免疫调节作用可能至少部分归因于产生IL-10的B细胞的刺激。