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第一部分基于PD-L1及TILs对上皮性卵巢癌肿瘤微环境进行免疫分型及其预后评估的研究目的:本研究旨在研究高级别上皮浆液性卵巢癌（HGSOC）患者肿瘤PD-L1及肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）表达情况,并进行免疫分型和预后评估,以期为卵巢癌患者抗PD-1/PD-L1治疗筛选患者和预后评估提供信息。方法:收集2007年1月至2012年2月期间就诊于上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科的107例上皮浆液性卵巢癌患者组织标本,免疫组化检测患者肿瘤PD-L1、CD3+、CD8+TILs表达情况。卡方检验比较PD-L1阳性组与阴性组间临床病理特征、肿瘤微环境中TILs评分的差异。Mann-Whitney法分析肿瘤细胞PD-L1表达与基质CD8+TILs数量的关系。使用Cox模型对患者总生存时间进行单因素及多因素回归分析。使用Kaplan-Meier法评估患者生存曲线,并使用log-rank评估两组或四组患者间中位总生存时间的差异。结果:PD-L1使用5%作为阳性界限值,发现24.30%和15.89%病例分别在肿瘤细胞和TILs膜上具有PD-L1的阳性表达。肿瘤细胞PD-L1表达分为肿瘤细胞弥漫性表达或肿瘤侵袭边缘的局灶性性表达,以后者多见。肿瘤细胞PD-L1表达与晚期FIGO分期（p=0.023）和丰富的基质CD8+TILs浸润相关（p=0.020）。多因素分析表明,较高数量的上皮内CD3+或CD8+TILs是较长总生存期（OS）的独立预后因素,而肿瘤细胞PD-L1表达仅是单因素分析中较差OS的预测因素。上皮性卵巢癌肿瘤微环境免疫分型结果显示:Ⅰ型（PD-L1+TILs+）,Ⅱ型（PD-L1-TILs-）,Ⅲ型（PD-L1+TILs-）,Ⅳ型（PD-L1-TILs+）占比分别为14.0%,38.3%,10.3%,37.4%。Kaplan-Meier分析显示肿瘤细胞PD-L1表达阴性/上皮内CD8+TILs数量较多的患者中位OS最长,而肿瘤细胞PD-L1表达阳性/较低数量的上皮内CD8+TILs的患者具有最短的中位OS（p＜0.001）。结论:上皮性卵巢癌肿瘤微环境中上皮内CD3+或CD8+TILs富集是较长总生存期（OS）的独立预后因素,免疫分型Ⅳ型患者的预后较好。评估HGSOC患者肿瘤微环境免疫分型对于筛选PD-1/PD-L1阻断治疗潜在获益人群及预后分层具有重要意义。第二部分以VEGF-A/VEGFR-2为靶标重塑肿瘤微环境逆转PD-1/PD-L1阻断治疗固有耐药的研究目的:本研究旨在靶向VEGF-A/VEGFR-2信号通路重塑肿瘤血管和免疫微环境,探索逆转PD-1/PD-L1阻断治疗固有耐药的突破口。方法:构建过表达VEGF-A质粒,慢病毒感染配合药物筛选获得稳定过表达VEGF-A的ct26、4T1、ID8细胞株,q RT-PCR法和Western blot法验证表达。CCK-8法、Transwell实验检测过表达细胞株与NC细胞株体外增殖、迁移及侵袭能力的变化。构建Balb/c小鼠的稳定过表达VEGF-A的血管生成亢进模型,阿帕替尼联合PD-1单抗治疗。监测小鼠体重及肿瘤体积变化,小动物活体成像观察肿瘤生长。免疫组化检测肿瘤组织CD31、VEGF-A、HIF-1α、CD8表达,免疫荧光对肿瘤VEGF-A和HIF-1α进行共定位。流式检测小鼠肿瘤组织免疫细胞（CD8、Tregs、M2型TAM、MDSCs）数量及比例变化,流式检测小鼠肿瘤组织中免疫细胞表面免疫抑制性分子表达变化。转录组RNA对小鼠肿瘤组织进行测序,研究小鼠肿瘤组织中免疫功能相关基因的表达差异。结果:体外实验证明过表达VEGF-A后,肿瘤细胞增殖、迁移侵袭能力均较对照细胞显著增强（p均＜0.05）。体内实验显示:与对照组相比,在接种高表达VEGF-A细胞的小鼠肿瘤模型中,其肿瘤体积、质量明显增加,肿瘤组织显示显著低氧、血管生成亢进、免疫抑制微环境。在血管生成亢进的小鼠肿瘤模型中,PD-1单抗单药组与PBS空白对照组相比,肿瘤体积无明显差异;而阿帕替尼联合PD-1单抗组肿瘤体积较PBS空白对照组、PD-1 m Ab单药组显著减小。联合治疗组肿瘤血管生成相关指标（CD31、VEGF-A、HIF-1α）及免疫微环境情况（CD8+T细胞、Tregs、M2型TAMs、MDSCs数量及比例）均较PBS空白对照组、PD-1 m Ab单药组明显改善。小鼠肿瘤组织测序显示阿帕替尼联合PD-1 m Ab组免疫激活相关基因表达量较PBS空白对照组、PD-1 m Ab和阿帕替尼单药组均显著增高。结论:稳定过表达VEGF-A的小鼠肿瘤微环境中血管生成亢进、缺氧相关指标高表达,肿瘤微环境中免疫抑制细胞（Tregs、M2型TAMs、MDCSs）比例增加。存在血管生成亢进的肿瘤对于PD-1 m Ab单药固有耐药,以阿帕替尼阻断肿瘤VEGF-A/VEGFR-2信号通路可重塑肿瘤免疫微环境,从而有效逆转PD-1/PD-L1阻断治疗固有耐药、对提高免疫治疗有效率具有重要意义。