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第一部分 组织工程血管种子细胞的培养 目的:为构建组织工程血管提供种子细胞。方法:无菌条件下采集大鼠及兔的骨髓,肝素抗凝,经淋巴细胞分层液(相对密度为1.073 g·mL-1)密度梯度离心分离骨髓单个核细胞,进而贴壁培养,获得骨髓间充质干细胞(MSCs)并传代。倒置显微镜下形态学观察及流式细胞术鉴定。结果:成功地分离、培养出大鼠及兔MSCs并传代。倒置显微镜下MSCs呈栅栏状,旋涡状排列。流式细胞术结果显示培养的原代鼠MSCs干细胞表面标志CD90阳性,基质细胞表面标志CD44阳性,不表达内皮细胞表面标志CD31及造血系细胞表面标志CD45。结论:所培养的MSCs为研究组织工程血管提供了细胞来源。 第二部分 组织工程血管支架材料的制备及材料生物相容性比较 目的:为构建组织工程血管提供支架材料并比较材料生物相容性。方法:和清华大学化工系合作,用高分子可降解材料聚3.羟基戊酸共聚物(PHBV)与聚丁二酸丁二酯(PBS)作为支架材料,运用流延成膜的方法制成不同质量百分比共混材料膜片;将培养的第3代兔MSCs种植于膜片上,于培养的第1、3、7、10、14天,倒置显微镜下、苏木素-伊红染色、甲苯胺蓝染色、扫描电镜检查观察材料与兔MSCs种植情况;四唑盐比色法检测材料上细胞增殖率;乳酸脱氢酶实验检测材料的细胞毒性。结果:成功地制备出不同质量百分比的PHBV与PBS共混材料膜片;甲苯胺蓝染色、扫描电镜结果显示聚PHBV/PBS=50/50共混材料组上细胞生长最为密集;倒置显微镜下无法观察附着于材料上的细胞,苏木素-伊红染色制备过程中细胞丢失多,不能为材料提高准确的信息;甲苯胺蓝染色可快速观察材料上细胞附着情况;四唑盐比色法结果显示PHBV/PBS=50/50共混材料组的细胞增殖率最高;乳酸脱氢酶实验结果表明