论文部分内容阅读
本文以鸭源沙门氏菌作为研究对象,成功建立了以鸭源沙门氏菌裂解抗原为包被抗原的间接ELISA方法,并应用于监测鸭源沙门氏菌蜂胶灭活苗免疫鸭血清抗体的消长变化,为疫苗质量的评估和制定合理的免疫程序提供技术支持。试验以鸭源沙门氏菌超声波裂解物为包被抗原,经ELISA各反应条件的优化,包括反应板均一性测定,羊抗鸭IgG-HRP工作浓度的筛选,抗原最适包被浓度和血清最佳稀释度的选择,抗原包被时间筛选,封闭时间的筛选,阴、阳性血清反应时间的筛选,酶标二抗的作用时间的筛选,底物显色时间的筛选,确定了间接ELISA操作程序：裂解抗原稀释20倍(19.51μg/ml)37℃包被2h；1%牛血清白蛋白封闭液37℃封闭1 h；待测血清(待测抗体)稀释200倍37℃与裂解抗原作用1h；酶标二抗稀释400倍,37℃作用1h；37℃避光显色15 mmin；避光加入终止液2 mol/L H2SO4,终止反应；酶联仪检测OD450值,判定结果阴阳性,成功建立了检测鸭源沙门氏菌抗体的间接ELISA方法；通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验,结果表明对鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌、鸭大肠杆菌、葡萄球菌、腺病毒的鸭阳性血清的检测结果为阴性；阻断效果明显；灵敏性好,为试管凝集的64倍以上；板内和板间变异系数分别在1.46%～3.12%和1.30%-3.17%之间,均小于5%,说明重复性好。试验采集鸭源沙门氏菌蜂胶灭活苗免疫雏鸭一免后5、10、15、20、25、35d,二免后5、10、15、25 d的血清,用间接ELISA法测定其OD450值,结果表明在1免后5d检测到抗体OD450值为0.589,判定为阳性,随后OD450逐渐升高；1免后25 d和1免后35 d,OD450值很接近,分别为1.112和1.113,其抗体可能上升到峰值后降低,也可能1免后抗体上升至1.1左右就不再增加；二免的OD4s0值均比1免高,说明2免效果比1免效果好。