论文部分内容阅读
目的：观察IVH后TGF-β1、MMP9及脑内铁代谢的变化，探讨其在IVH后脑室损伤及细胞凋亡中的作用。方法：（1）健康雄性Wistar大鼠84只，随机分为：正常组，盐水对照组术后1d、3d、7d、28d，脑室注血组术后1d、3d、7d、28d共9组，130ul自体尾动脉血二次注射法制作大鼠右侧侧脑室出血模型，造模后不同时间点，大体标本、扫描电镜及HE染色法评价脑室损伤情况；（2）Wistar大鼠108只，随机分为：正常组、盐水对照组术后1d、3d、7d、28d，脑室注血组术后1d、3d、7d、28d共9组，荧光实时定量PCR法检测TGF-β1mRNA水平，Western blot法检测MMP9表达变化；（3）Wistar大鼠25只，随机分为盐水对照组和脑室注血组术后1d、3d、7d、28d（n=5）。红菲绕啉法测定血清及脑组织非血红素铁含量；（4）Wistar大鼠162只，随机分为正常组、盐水组术后1d、3d、7d、28d，脑室注血组术后1d、3d、7d、28d共9组，荧光实时定量PCR、Western Blot及免疫荧光染色法检测脑室周围铁蛋白（Fn）、转铁蛋白（Tf）、转铁蛋白受体1（TfR1）、二价金属离子转运体1（DMT1）、铁调节蛋白2（IRP2）、血红素加氧酶1（HO1）表达变化；8-OHdG免疫荧光染色及Tunel法检测细胞凋亡情况；（5）Wistar大鼠18只，随机分为对照组、脑室出血后去铁胺治疗组和盐水对照组。电镜下观察脑室壁结构变化，Tunel法检测细胞凋亡情况。结果：（1）对照组脑室及其周围组织无明显变化，室管膜细胞排列整齐，组织结构清晰，脑室注血组大鼠术后1d大体及HE染色见右侧脑室内充满积血，脑室周围白质水肿，室管膜细胞排列紊乱，松散；术后3d侧脑室积血减少，室管膜部分断裂，可见脑室膜细胞增生；术后28d胶质细胞增生及室管膜断裂均较明显。电镜下对照组纤毛致密，排列规则有序，基膜完整；脑室注血组纤毛紊乱、断裂，基膜脱落逐渐加重。（2）术后1天TGF-β1mRNA水平即明显上升，显著高于盐水组（P<0.01），术后3天TGF-β1mRNA水平较术后1d明显下降（P<0.001），但仍高于对照组（P<0.05），术后7d TGF-β1mRNA水平再次上调，形成第二高峰，术后28dTGF-β1mRNA水平再次下降，但仍高于盐水对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；术后1d MMP9蛋白含量即开始上升，与盐水组比较差异具有显著性（P<0.05），随术后时间延长，MMP9蛋白表达持续增加，至术后28天达高峰，术后28天MMP9蛋白含量与盐水组比较差异显著（P<0.001）。(3)IVH后血清铁含量组间比较差异具有显著性（P<0.01），但各组与对照组相比均无差别。IVH术后1d脑铁含量即明显增加，术后7d表达量最高，之后持续高表达至术后28d。(4)Tf mRNA水平随术后时间延长有升高趋势，术后1d即显著高于对照组，术后3d达高峰，之后逐渐下降，28d时明显低于对照组。Tf术后1d表达较对照组增多，3d达高峰，7d开始下降，至28d表达量明显低于对照组（P<0.01）。TfR1术后3d表达量下降，之后表达上调，术后28d与术后7d相比无明显变化但均高于对照组。DMT1mRNA水平术后第1d明显低于对照组（P<0.01），随术后时间延长继续下降，术后7d表达量最低，术后28d较前恢复，与对照组比较无明显变化。DMT1术后1d表达与对照组比较无明显变化，之后随时间延长表达量下降，至术后7d最低，明显低于对照组，术后28d基本恢复正常，与对照组相比无明显差异。IRP2mRNA水平术后第1d较对照组下降，之后持续下降至术后7d达到最低水平，术后28d较前恢复，但仍明显低于对照组（P<0.001）。IRP2蛋白术后1d表达与对照组比较无明显变化，之后随时间延长表达量下降，术后3d表达量最低，术后28d基本恢复正常，与对照组相比无明显变化。术后1d HO1表达量较对照组明显上升，3d略有下降，但与术后1d相比无显著性差异；术后7d表达较3d明显下降，术后28d表达仍高于正常组。（5）8-OHdG在对照组阳性率较低，随术后时间延长，阳性率持续增加，术后7d与28d相比无明显差异，均明显高于正常。海马及脑室周围组织Tunel染色变化基本一致，对照组阳性率较低，术后1d阳性率即较对照组增高，之后阳性表达持续增加，至术后28d阳性率最高。（6）脑室出血后7d盐水治疗组电镜下脑室顶璧纤毛变细、断裂明显，基膜脱落，基膜下组织裸露；DFO治疗组纤毛断裂减轻，基膜脱落不明显；Tunel染色阳性率DFO治疗组较盐水组明显降低。结论：（1）IVH后脑室周围组织病理改变早期以水肿为主，后期增生逐渐明显；（2）IVH后脑室损伤、扩张可能与TGF-β1、MMP9表达失衡有关；（3）铁代谢紊乱在IVH后脑室损伤及细胞凋亡中发挥重要作用；（4）去铁胺治疗能减轻IVH后脑室壁损伤及细胞凋亡。