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背景:
小细胞肺癌(Small cell lung carcinoma,SCLC)是一种恶性程度高,预后极差的神经内分泌肿瘤,约占肺癌的15%,多数患者在疾病早期和化疗后往往都会出现肿瘤转移。然而目前SCLC的发生发展过程中调控其肿瘤细胞侵袭转移的精确分子机制尚不清楚。趋化因子14(C-X-C motif chemokine ligand-14,CXCL14),也称BRAK,属于CXC趋化因子家族,其受体至今未知。据以往研究CXCL14在调节白细胞浸润到炎症组织,以及其他与免疫监视和癌症进展相关的生物学过程中起着关键作用。CXCL14在不同的肿瘤中呈现不同的表达趋势,显示背景依赖性的促肿瘤或抗肿瘤效应。成纤维细胞生长因子受体家族蛋白(Fibroblast growth factor receptor,FGFRs)属于受体型蛋白酪氨酸激酶家族,在肿瘤中,FGFR基因扩增、融合或外显子错义突变均可造成FGFR蛋白过表达及其信号通路过度激活。
我们在临床病理工作中发现,CXCL14与FGFR3均在小细胞肺癌中高表达,CXCL14蛋白表达与SCLC患者不良预后密切相关。因此我们拟研究CXCL14/FGFR3是否影响SCLC肿瘤的侵袭和迁移。
目的:
本文旨在研究CXCL14/FGFR3的配-受体关系及其调控SCLC发生发展侵袭调控机制,尤其是该信号轴调控MMPs家族蛋白表达的机制,为进一步完善小细胞肺癌的潜在治疗靶点提供依据。
方法:
1.用免疫组织化学方法检测SCLC患者肿瘤组织中CXCL14,FGFRs,MMP2/9的表达。
2.通过MOE(The Molecular Operating Environment)分子模拟蛋白质相互作用揭示CXCL14与FGFR3可能的相互作用位点,且应用表面等离子计数(Surface Plasmon Resonance-SPR)测定蛋白CXCL14和蛋白FGFR3相互作用以及亲和力大小。
3.通过划痕实验及transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力。
4.通过Westernblot检测敲除、过表达CXCL14后蛋白水平各个指标的变化,以及检测加入重组CXCL14蛋白、敲除FGFR3和敲除FGFR3后加重组CXCL14蛋白后蛋白水平各个指标的变化。
结果:
1.通过对36例SCLC患者组织免疫组织化学检测其结果显示CXCL14在SCLC肿瘤组织中呈高表达状态(29/36,81%),CXCL14阳性的患者生存期较CXCL14阴性的患者短(P=0.0360)。在36例SCLC标本中,FGFR3明显过表达(24/36,67%),阳性率远远高于FGFR1、FGFR2、FGFR4(25%、44%、8%)。MMP2/9在SCLC患者肿瘤组织中免疫组化阳性率较高。
2.应用MOE的protein-protein模块对接发现蛋白CXCL14与蛋白FGFR3结合位点可能是残基位置为470-590区域,SPR计数检测其亲和力常数(KD)为:9.96e-8。
3.Transwell实验及划痕实验结果显示沉默CXCL14抑制了SCLC细胞的迁移和侵袭,过表达CXCL14促进了SCLC细胞的迁移和侵袭。另外外源性加入重组CXCL14蛋白促进了SCLC细胞的侵袭和迁移,敲除FGFR3抑制了SCLC细胞的迁移和侵袭,敲除FGFR3后加重组CXCL14蛋白同样抑制了SCLC细胞的迁移和侵袭。
4.Westernblot实验检测显示敲除CXCL14后下调了SCLC细胞的MMP2/9,上调了TIMP1;过表达CXCL14和加重组CXCL14蛋白上调了SCLC细胞的MM2/9,下调了TIMP1;敲除FGFR3下调了SCLC细胞的MMP2/9,上调了TIMP1;敲除FGFR3后加重组CXCL14蛋白下调了SCLC细胞的MMP2/9,上调了TIMP1。
结论:
1.CXCL14在SCLC患者肿瘤中高表达并且与不良预后有关。
2.小细胞肺癌中,FGFR3是CXCL4的受体,CXCL14/FGFR3信号轴的激活在小细胞肺癌MMP2/9表达调控中起关键作用。
3.CXCL14/FGFR3信号轴的过度激活对SCLC侵袭、迁移等恶性生物学行为起关键作用,可能是肿瘤治疗的潜在靶点。
小细胞肺癌(Small cell lung carcinoma,SCLC)是一种恶性程度高,预后极差的神经内分泌肿瘤,约占肺癌的15%,多数患者在疾病早期和化疗后往往都会出现肿瘤转移。然而目前SCLC的发生发展过程中调控其肿瘤细胞侵袭转移的精确分子机制尚不清楚。趋化因子14(C-X-C motif chemokine ligand-14,CXCL14),也称BRAK,属于CXC趋化因子家族,其受体至今未知。据以往研究CXCL14在调节白细胞浸润到炎症组织,以及其他与免疫监视和癌症进展相关的生物学过程中起着关键作用。CXCL14在不同的肿瘤中呈现不同的表达趋势,显示背景依赖性的促肿瘤或抗肿瘤效应。成纤维细胞生长因子受体家族蛋白(Fibroblast growth factor receptor,FGFRs)属于受体型蛋白酪氨酸激酶家族,在肿瘤中,FGFR基因扩增、融合或外显子错义突变均可造成FGFR蛋白过表达及其信号通路过度激活。
我们在临床病理工作中发现,CXCL14与FGFR3均在小细胞肺癌中高表达,CXCL14蛋白表达与SCLC患者不良预后密切相关。因此我们拟研究CXCL14/FGFR3是否影响SCLC肿瘤的侵袭和迁移。
目的:
本文旨在研究CXCL14/FGFR3的配-受体关系及其调控SCLC发生发展侵袭调控机制,尤其是该信号轴调控MMPs家族蛋白表达的机制,为进一步完善小细胞肺癌的潜在治疗靶点提供依据。
方法:
1.用免疫组织化学方法检测SCLC患者肿瘤组织中CXCL14,FGFRs,MMP2/9的表达。
2.通过MOE(The Molecular Operating Environment)分子模拟蛋白质相互作用揭示CXCL14与FGFR3可能的相互作用位点,且应用表面等离子计数(Surface Plasmon Resonance-SPR)测定蛋白CXCL14和蛋白FGFR3相互作用以及亲和力大小。
3.通过划痕实验及transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力。
4.通过Westernblot检测敲除、过表达CXCL14后蛋白水平各个指标的变化,以及检测加入重组CXCL14蛋白、敲除FGFR3和敲除FGFR3后加重组CXCL14蛋白后蛋白水平各个指标的变化。
结果:
1.通过对36例SCLC患者组织免疫组织化学检测其结果显示CXCL14在SCLC肿瘤组织中呈高表达状态(29/36,81%),CXCL14阳性的患者生存期较CXCL14阴性的患者短(P=0.0360)。在36例SCLC标本中,FGFR3明显过表达(24/36,67%),阳性率远远高于FGFR1、FGFR2、FGFR4(25%、44%、8%)。MMP2/9在SCLC患者肿瘤组织中免疫组化阳性率较高。
2.应用MOE的protein-protein模块对接发现蛋白CXCL14与蛋白FGFR3结合位点可能是残基位置为470-590区域,SPR计数检测其亲和力常数(KD)为:9.96e-8。
3.Transwell实验及划痕实验结果显示沉默CXCL14抑制了SCLC细胞的迁移和侵袭,过表达CXCL14促进了SCLC细胞的迁移和侵袭。另外外源性加入重组CXCL14蛋白促进了SCLC细胞的侵袭和迁移,敲除FGFR3抑制了SCLC细胞的迁移和侵袭,敲除FGFR3后加重组CXCL14蛋白同样抑制了SCLC细胞的迁移和侵袭。
4.Westernblot实验检测显示敲除CXCL14后下调了SCLC细胞的MMP2/9,上调了TIMP1;过表达CXCL14和加重组CXCL14蛋白上调了SCLC细胞的MM2/9,下调了TIMP1;敲除FGFR3下调了SCLC细胞的MMP2/9,上调了TIMP1;敲除FGFR3后加重组CXCL14蛋白下调了SCLC细胞的MMP2/9,上调了TIMP1。
结论:
1.CXCL14在SCLC患者肿瘤中高表达并且与不良预后有关。
2.小细胞肺癌中,FGFR3是CXCL4的受体,CXCL14/FGFR3信号轴的激活在小细胞肺癌MMP2/9表达调控中起关键作用。
3.CXCL14/FGFR3信号轴的过度激活对SCLC侵袭、迁移等恶性生物学行为起关键作用,可能是肿瘤治疗的潜在靶点。