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滑膜是疏松的结缔组织，具有形成润滑、营养软骨和吞噬细胞外基质碎片的作用。B型滑膜细胞即成纤维样滑膜细胞是滑膜组织的两种主要细胞成分之一。因为正常的滑膜组织具有疏松的三维结构，其生理特点与其三维结构有密切的关系，本研究尝试将明胶三维细胞培养体系应用于滑膜细胞的体外培养，使滑膜细胞在体外较长时间内存活，又能有效地保持培养滑膜细胞良好的分化表型，并对生长于该环境中的滑膜细胞的细胞生物学特性进行了初步探讨。 颞下颌关节紊乱病晚期，软骨广泛破坏，滑膜严重变性，滑膜是关节软骨的主要营养来源，所以单纯针对关节软骨的治疗效果不佳。本研究利用明胶海绵材料做支架，建立了人滑膜细胞体外三维立体培养模型，为移植滑膜治疗颞下颌关节紊乱病晚期病变进行前期的尝试。 1．材料与方法 1．1滑膜细胞贴壁培养及在明胶支架中培养：滑膜取自TMJ髁突肥大无滑膜病变的手术患者。分离出平滑光亮的滑膜组织，Ⅱ型胶原酶消化后。于37℃5％CO2的条件下培养。预备培养支架时，将支架剪切直径1cm、厚约2mm圆片，经三氯乙烷浸泡消毒30min，反复冲洗，吹干后紫外线，置入24孔板。加培养基浸泡过夜。取第三代滑膜细胞接种，细胞悬液刚好覆盖细胞支架，接种细胞的终末浓度达1×105／L-1，接种一天后将支架转入6孔板中继续培养。1．2光学显微观察、及丫叮橙（AO）荧光染色观察：倒置相差显微镜下观察支架中滑膜细胞的生长状态。培养2周后取细胞支架，4％甲醛固定，1％AO染色1min，CaCl2冲洗2min，PBS反复冲洗，荧光激发（激发光455nm）。1．3组织化学及透射、扫描电镜观察：培养2周后取细胞支架，4％甲醛固定，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，组织切片，厚度15μm。石蜡切片脱蜡入水，Von Kossa’s染色，油红O染色。支架培养2周后，用2％戊二醛固定，取部分标本用乙腈系列脱水，喷金后扫描电镜观察。另一标本用锇酸固定树脂包埋，切片后进行电镜观察。 2．结果明胶支架中B型滑膜细胞形状为短梭形，胞体透亮，布满整个空隙。Von Kossa’s染色，油红O染色的结果阴性表明滑膜细胞没有成骨样变、脂肪样变。通过支架中滑膜细胞扫描透射电镜的观察，滑膜细胞表面存在微绒毛结构，细胞内富含粗面内质网和分泌颗粒。滑液的主要成份透明质酸呈网状结构，滑膜细胞中的分泌颗粒内容物与其结构相似。 3．讨论本研究中，使用明胶培养支架的来自牛的去除细胞的真皮胶原，与滑膜细胞外基质的成份和组织排列基本相似，其主要成分是Ⅰ、Ⅱ型胶原的混合物，为滑膜细胞的生长、增殖、迁移和结合提供了合理的三维环境。良好的可降解性细胞支架即有利于营养物质均一扩散到细胞之间，又利于细胞与细胞之间的联系。在明胶中，滑膜自身所分泌的蛋白如H型胶原、蛋白多糖等，被局限在细胞的周围，使细胞处于丰富的细胞外基质的包裹之中。这类似于体内环境，滑膜胞周形成了细胞外基质的层次结构，细胞与细胞外基质之间的密切关系得到了保存。支架中生长的滑膜细胞能保持良好的分化表型，可能与这种微环境密切有关。研究中，只采用B型滑膜细胞作为种子细胞，接种于细胞培养支架，欲模拟滑膜发育过程重建滑膜。滑膜组织中有两种成分:滑膜巨噬细胞和滑膜成纤维细胞。根据滑膜发育的理论，一般认为A型滑膜细胞来源于骨髓的单核巨噬细胞系统，B型滑膜细胞可能来自滑膜下层胚胎间充质细胞。滑膜巨噬细胞是在滑膜形成晚期由骨髓单核巨噬细胞系统迁入。