微小杆菌致牛奶腐败变质的相关机制研究

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腐败变质是普遍存在于食品中的自然现象,其本质是食品中的营养物质被微生物分解或活性酶降解所产生一系列生物化学反应的变化过程,感观上主要表现为颜色、气味、口感和组织状态等的改变,微观上主要体现在食品中营养成分的分解和代谢副产物的形成。牛奶作为一类重要的食材,因其富含营养而被广范用于各种奶制品的生产和加工,但也因其特殊性致使其保质期较短,易于滋生细菌导致腐败变质,然而关于腐败变质的相关机制及其进程研究却鲜有报道。本研究期望通过建立牛奶腐败变质模型,研究其腐败变质的相关规律及机制,建立特异性分子靶标的可视化快速检测体系,为牛奶腐败变质的预防控制以及早期预警提供支持。在前期的研究中,我们在腐败变质的牛奶中发现一个与微小杆菌属Exiguobacterium sibiricum(简称E.sibiricum)基因序列高度同源的优势菌株。有关微小杆菌在腐败变质食品中的研究已被多次报道,据悉微小杆菌广泛分布于自然环境中,能够在较宽的温度范围和pH范围内稳定生长,但关于其在腐败变质过程中的具体作用尚不清楚。因此,为明确微小杆菌在致腐败变质中的分子功能,本研究分离纯化了前期在腐败变质牛奶中发现的优势菌株,将其命名为微小杆菌Sm 14-5,对其进行生理生化特性的鉴定,并进一步建立其腐败变质的模型,研究牛奶在腐败变质过程中感官性状和营养成分方面的变化,通过筛选微小杆菌Sm 14-5菌株的特异性基因,建立了基于环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和横向流动试纸条法(Lateral flow dipstick,LFD)的可视化检测体系,应用于牛奶腐败变质早期微小杆菌的快速检测:第一章:阐述国内外对牛奶腐败变质生物因素相关机制的研究进展,重点介绍牛奶腐败变质的规律和微小杆菌相关研究现状及其鉴定方法。第二章:分离纯化腐败变质牛奶中发现的优势菌株——微小杆菌Sm 14-5,以微小杆菌E.sibiricum 255-15标准菌株作为对照,对分离纯化的微小杆菌Sm 14-5菌株进行生理生化特性的鉴定,研究其在生理生化表型和耐药表型方面的差异。第三章:通过建立微小杆菌分离菌株Sm 14-5和标准菌株E.sibiricum 255-15的牛奶腐败变质模型,研究了牛奶在感官性状、营养成分和细菌代谢通路等方面的差异,证实了微小杆菌能够导致牛奶的腐败变质,且发现微小杆菌Sm 14-5菌株和E.sibiricum255-15标准菌株在乙酸、丙酸等短链脂肪酸以及pH等方面具有明显的差异。第四章:通过筛选微小杆菌的特异性管家基因,基于LAMP-LFD建立微小杆菌的快速可视化检测体系,用于在牛奶腐败变质早期对微小杆菌的快速检测,最终用于对微小杆菌导致的牛奶腐败变质的鉴定。经对腐败变质牛奶的检测,发现该方法具有较好的特异性,且检测限低至10-6 ng/μL。
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